乾燥ストレス応答の転写調節に関与するシス因子DREに結合するタンパク質因子の同定

鉴定与顺式因子 DRE 结合参与干旱胁迫反应转录调控的蛋白质因子

• 批准号: 07740630
• 负责人: 野路 征昭
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07740630/
• 关键词: 乾燥ストレス応答; DRE; 転写因子; サウスウエスタン法

シロイヌナズナの乾燥ストレス誘導性遺伝子群の中で、rd(responsive to dehydration)29A遺伝子の転写開始領域に見いだされた乾燥応答に関与する制御領域DRE(Dehydration Responsive Element)に結合するタンパク質因子を同定し、またこのDNA結合タンパク質がrd29A遺伝子の発現にどのように関わっているかという問題を解明、考案するために、DREに結合するタンパク質因子のcDNAクローンの単離を試みた。乾燥処理、低温処理および無処理のシロイヌナズナよりmRNAを調整後、cDNAを合成した。この様にして得たcDNAをそれぞれ大腸菌発現型λファージベクターであるλgt11と結合させることによりcDNAライブラリーを作製した。これを用いてサウスウエスタン法によりDREに結合するタンパク質因子のcDNAの単離を試みた。その結果、DRE配列に結合するタンパク質をコードするcDNAクローンがいくつか得られた。その塩基配列の一部を決定し、ホモロジーサーチを行ったところ、得られたクローンの大部分はRNA結合タンパク質など既知のものであった。ホモロジーサーチの結果、データーベースに登録されている配列との間で有意なホモロジーのない未知の塩基配列を持つcDNAクローンも3個得られた。これら3個のcDNAクローンの長さは2.0kb^〜2.1kbと異なるが同一の遺伝子由来の産物であることが確かめられた。しかしこれらのcDNAの全長の塩基配列を決定したところ、タンパク質をコードする領域が見つからなかった。またプロトプラストを用いたトランジェット発現系を用いて、得られたクローンのDREに対する転写活性化の効果を解析したが、転写の活性化は認められなかった。以上の結果より、原核生物である大腸菌を用いたサウスウエスタン法では、植物などの真核生物における転写因子のクローニングは困難であるのかもしれない。今後は真核生物である酵母を用いたクローニング法も検討していく。

In the middle of the third generation of inducible genes (responsive to dehydration)29A seed's writing start field See the middle of the drying process Related to the control field DRE (Dehydration Responsive Element) To solve the problem of identification, identification, and isolation of DNA binding factors associated with the development of the 3rd 29A gene. After drying treatment, low temperature treatment and no treatment, the mRNA is adjusted and the cDNA is synthesized. This is the first time that the cDNA has been produced. This is the first time we've ever seen a DNA fragment from a DNA fragment. As a result, DRE alignment is combined with cDNA sequencing. A part of the base alignment is determined, and most of the RNA binding is determined. As a result of the The length of the three cDNA fragments is 2.0kb ~ 2.1kb, and the origin of the same cDNA fragment is 2.0kb ~ 2.1kb. The full length of the cDNA is determined by the sequence of DNA sequences. For example, if you want to use the DRE, you can use the DRE to analyze the activation effect. The above results show that prokaryotes and eukaryotes are difficult to write. In the future, eukaryotes will be used for research.