ホルモンによるウナギの精子形成開始の分子機構;生殖細胞の分化マーカーの検索

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人工飼育下のニホンウナギの精巣は、脊椎運動で唯一、精子形成をin vitro系で完全に再現することができる。この時、精子形成の開始は、生殖腺刺激ホルモン(GTH)-11-ketotestosterone-アクチビンBという経路で誘起される。今回、この精子形成の開始の分子機構を明らかにするために、精子形成の開始に伴って生殖細胞で発現の変化する遺伝子を検索することを試みた。GTH処理後、0、3日目(精原細胞が増殖し始める)の精巣組織より、poly(A)^+・RNAを調製し、サブトラクション法、RNA differential display法を用いて、発現の促進される遺伝子と抑制される遺伝子を検索した。得られた遺伝子断片をプローブにして、ノーザン解析をした結果、発現の促進されるもの、抑制されるもの、それぞれ、2、3ケの遺伝子断片を得た。この中で、発現の促進されるもの、抑制されるもの、それぞれ、2、3ケの遺伝子断片を得た。この中で、発現の促進されるもの一つ(RD3-3)をプローブとして、ウナギ精巣cDNAライブラリーをスクリーニングし、完全長のORFを含むcDNAクローンを単離した。シークエンスした結果、この遺伝子は、DEAD-box protein familyに属することが、明らかとなった。このクローンは、DEAD-box protein familyの一員であるmvh,RVLG,XVLG1とアミノ酸レベルで、約70%の相同性を示した。ノーザン解析をした結果、精巣、卵巣で発現が認められたが、脳、肝臓、心臓、頭腎などでは、発現が認められなかった。精子形成の開始に伴う、この遺伝子の発現は、精子形成の開始と共に増大し、GTH処理後、9日でピークに達した。また、in situ hybridizationを行った結果、この遺伝子の発現は、生殖細胞に限られること、精原細胞から第一次精母細胞にかけてみられることが明らかとなった。最近、この遺伝子のコードするタンパク質を特異的に認識する抗体が得られるので、現在、タンパクの局在、タンパク量の変化について検討している。