幹細胞型精原細胞にのみ局在する抗原分子のcDNAクローニングとその性質

仅存在于干细胞型精原细胞中的抗原分子的 cDNA 克隆和特性

• 批准号: 09740619
• 负责人: 小林 亨
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Okazaki National Research Institutes
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09740619/
• 关键词: 精子形成; 卵形成; 幹細胞; 時期特異的抗原; 性分化; 生殖細胞; 精原細胞; 分化; 硬骨魚類; ウナギ; Xenopus

脊椎動物で、ウナギは、唯一、in vitro系で精子形成を完全に再現できる動物であり、これまでに生殖腺刺激ホルモン/11-ketotestosterone(精子形成誘起ホルモン)/アクチビンβというカスケードで精子形成が開始することが明らかとなっている。この研究は精子形成開始の分子機構を「生殖細胞の分化/細胞分裂周期の転換」という側面から明らかにすることによって精子形成過程における生殖細胞と体細胞間の協関を明らかにすることを目的とする。最近、筆者が作製したポリクローナル抗体の一つが、少なくとも、ウナギを含む数種の硬骨魚類(メダカ、ゼブラフィッシュ、ティラピア、ニジマス)と無尾両生類(アフリカツメガエル)の精巣組織内の約38kDaの蛋白質を特異的に認識すること、さらに、幹細胞型の精原細胞の細胞質の一部のみを認識し、精子形成の方向に分化した精原細胞(8型/二次精原細胞)、精母細胞、精子細胞、精子、精巣体細胞を認識しないことを免疫組織化学法によって確かめた。この抗体をプローブとして、この抗原分子をコードするcDNAをクローニングし、この抗原分子の化学的実態を解明することを試みている。ウナギの精巣組織のmRNAより作製した発現ライブラリーを上述した抗体(anti-spermatogoniaspecificantigen-1:anti-SGSA-1)でイムノスクリーニングを行った結果、既に幾つかのポジティブクローンを得た。現在、得られたcDNAがコードしているタンパク質のリコンビナントを用いて抗体の作製を行なっており、このcDNAがSGSA-1であるか否かの検定を継続中である。また、SGSA-1抗体を用いてSGSA-1の性質を調べたところ、上述の精巣での分布を調べた動物において、精原細胞以外に卵巣中の幹細胞型の卵原細胞、増殖型の卵原細胞、そして卵母細胞(いわゆる肥大卵母細胞のステージまで)の細胞質に特異的な免疫反応産物がみられた。また、イムノプロット解析から精巣組織と同様に約38kDaの蛋白質を特異的に認識することを確かめた。現在まで、この分子の実態は明らかになっていないが、これら一連の結果はSGSA-1が生殖細胞の性分化に重要な役割を果たしていることを強く示唆するものである。

Vertebrate sperm formation is completely reproduced in the vertebrate system. Animals are stimulated by gonads/11-ketosteroid (sperm formation induction)/ The molecular mechanism for the initiation of spermatogenesis is described as "germ cell differentiation/cell division cycle switching." Recently, the author has been working on several kinds of teleost fish, including several kinds of teleost fish.(メダカ、ゼブラフィッシュ、ティラピア、ニジマス)と无尾両生类A protein of approximately 38kDa was specifically identified in spermatogonia, and part of the cytoplasm of stem cell-type spermatogonia was identified. The direction of spermatogenesis was identified in spermatogonia (type 8/secondary spermatogonia), spermatocytes, sperm cells, and sperm somatic cells by immunohistochemistry. The antibody is expressed as a protein, and the antigen molecule is expressed as a protein. The expression of mRNA in sperm tissue was detected by anti-spermatogonia specific antigen-1:anti-SGSA-1. The results showed that the expression of mRNA in sperm tissue was detected by anti-SGSA-1. Now, we have obtained the cDNA from SGSA-1, which is used for antibody production. SGSA-1 antibodies modulate the properties of SGSA-1 and modulate the distribution of these sperm in animals, stem cell-type oogonia, fertile oogonia, and oocytes (hypertrophic oocytes). A protein of approximately 38kDa was identified in the sperm tissue. Now, the molecular state of SGSA-1 is very important for the sexual differentiation of germ cells.

项目成果

Kobayashi,T.et al.: "Immunolocalization of steroidogenic enzymes(P450scc,P450c17,P450arom and 3β-HSD)in immature and mature testes of rainbow trout(Oncorhynchus mykiss)" Cell Tissue Res.292. 573-577 (1998)

Kobayashi, T. 等人：“虹鳟鱼（Oncorhynchus mykiss）的未成熟和成熟测试中类固醇生成酶（P450scc、P450c17、P450arom 和 3β-HSD）的免疫定位”Cell Tissue Res.292（1998）。

Kobayashi,T.et al.: "A Novel stage-specific antigen is expressed only in early stages of spermatogonia in Japanese eel,Anguilla japonica testis." Mol.RepRod.Dev.51. 355-361 (1998)

Kobayashi,T.et al.：“一种新的阶段特异性抗原仅在日本鳗鲡精原细胞的早期阶段表达。”

Kobayashi,T. et al.: "Immunolocalization of steroidogenic enzymes (P450scc,P450c17,P450arom and 3b-HSD)in immature and mature testes of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss)." Cell Tissue Res. (in press).

小林，T.