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分子細胞学的手法による新たなオオムギ染色体マーカーの創出

使用分子细胞学方法创建新的大麦染色体标记

基本信息

批准号：
07760004
负责人：
武田真
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760004/
关键词：
オオムギ染色体分染法 in situハイブリダイゼーション

项目摘要

本研究では、オオムギの新たな染色体マーカーを分染法および分子細胞学的手法によって創出することを試みた。まず、野生オオムギ(Hordeum spontaneum)および栽培オオムギ(Hordeum vulgare)を各3系統供試し、C-分染法によるバンドパターンの変異を調査した。その結果、野生オオムギは3系統とも第5染色体短腕の中部に栽培オオムギではみられない鮮明なバンドを持つことが明らかになった。野生オオムギと栽培オオムギとのF_1雑種の減数分裂第一中期の染色体をC-分染したところ、野生オオムギと栽培オオムギの第5染色体短腕間で正常に対合することがわかった。このことから野生オオムギの第5染色体短腕のバンドは構造異常ではなく、多型によって生じたものであることが明らかになった。次に、同一の染色体核板に対して分染とゲノミックin situハイブリダイゼーションを連続的に行う方法を、四倍性コムギの一種であるTriticum abyssinicumを材料として検討した。その結果、先にin situハイブリダイゼーションを行った標本をひき続いてN-分染する方法では、鮮明なN-分染像を得ることができなかった。しかし、先にN-分染を行い、脱染色してin situハイブリダイゼーションすると、良好なシグナルが得られることが明らかになった。さらに、コムギにオオムギ染色体が添加された系統を供試し、ゲノミックin situハイブリダイゼーション法を適用した。コムギの全DNAを無標識とし、オオムギの全DNAをビオチンで標識し、両者を約25:1の濃度比で混合したものをプローブとし、染色体標本にin situハイブリダイゼーションさせ、シグナルを蛍光検出した。その結果、オオムギ染色体とコムギ染色体を識別することができた。現在、混合する濃度比を変化させ、バンド状のパターンが得られないかどうかを検討している。

The present study is aimed at creating a new method of chromosome analysis and molecular cytology. 3-system test, C-staining, Hordeum spontaneum and Hordeum vulgare were used to investigate the differences among different species. The result is that the wild type has the third system and the fifth chromosome has the middle part. The cultivated type has the third system and the fifth chromosome has the third system. C-chromosome segregation at metaphase 1 of meiosis between wild and cultivated F_1 species was normal, while chromosome 5 of wild and cultivated F_1 species was normal. The fifth chromosome is structurally abnormal. The method of tetraploid chromosome analysis is described in detail below. The results are as follows: 1. The method of N-color separation is as follows: 1. N-dye first, de-dye first, de-dye first, In addition to the above, the chromosome addition method should be applied to the test. The total DNA of the chromosome is not labeled, and the total DNA of the chromosome is labeled, and the concentration ratio of the chromosome is about 25:1. The result is that the chromosome is identified. Now, the concentration ratio of the mixture is changed, and the mixture is changed.