神経伝達物質の放出過程を阻害する生理活性物質の探索とその作用の解析
寻找抑制神经递质释放过程的生理活性物质并分析其作用
基本信息
- 批准号:07760076
- 负责人:
- 金额:$ 0.7万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
- 财政年份:1995
- 资助国家:日本
- 起止时间:1995 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
一次検索系としてPC12細胞からのノルエピネフリン(NE)放出阻害を指標とし、カビ2200株、放線菌3600株の培養抽出液の検索を行った。続いて二次検索系としてCa^<2+>イオノフォアであるイオノマイシン(1mM)存在下に同様の実験を行った。再現性よく阻害活性が認められたものについて、さらにATPの放出阻害についても検討した。その結果、カビからの2サンプル(LF11039、LF10512)、および放線菌からの2サンプル(LS8877、LS9940)に顕著な阻害活性を見出した。これについてさらに三次検索系として好中球からのβ-グルクロニダーゼ放出に対する作用を調べた。その結果LF11039、LF10512、LS9940はいずれも強い阻害活性を示したが、LS8877は阻害よりもむしろ若干促進するという結果を得た。このことから、前三者は調節性分泌に共通する過程(おそらく膜融合過程)の阻害剤であるが、LS8877は神経伝達物質の放出に特異的な阻害剤であることが示唆された。またアクリジンオレンジを用いて酸性オルガネラに対する作用を調べた結果、候補物質はいずれも阻害活性を示さず、分泌阻害剤であるコンカナマイシン類とは作用が異なることがわかった。さらに候補物質の毒性をPC12細胞を用いて調べたところ、いずれもNE放出を阻害する濃度で増殖の抑制はみられなかった。この結果は候補物質が調節性分泌に特異的な機構を標的としていることを示唆する。次に各活性物質の精製を行った。比較的活性の強いLF11039株を大量培養し、菌体から80%アセトン抽出、酢酸エチル転溶後2回のシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行い、約19mgの淡黄色の結晶を得た。本物質は230、252、320、370nmの各波長に吸収極大を示し、またFAB-MSスペクトル解析の結果分子量が390であることが解った。^1H-および^<13>C-NMR解析から15〜16個の炭素のシグナルが認められ、それらがいずれもSP^2炭素であることが示唆された。LF10512、LS8877、LS9940についても精製を試みている。以上いずれの物質も最終的な構造決定には至っていないことから、引き続き精製・機器分析を行い、活性物質の本体を明らかにしたい。
The culture extracts of PC12 cells and 3600 strains of actinomycetes were tested for the first time. In the presence of Ca^<2+> 2 +, the same effect was observed. Reproducibility: Reproducibility: Reactivity: Reactivity The results showed that the activity of the two inhibitors (LF11039, LF10512) and the two inhibitors (LS8877, LS9940) was significantly higher than that of the other inhibitors. This is the third order of the chain system. It is the third order of the chain system. LF11039, LF10512, LS9940, LS8877, LS8877 LS8877 The first three are the common process of regulatory secretion (membrane fusion process) and the specific resistance to the release of substances. The results of the adjustment of the effect of the acid on the secretion of the candidate substance show that the activity of the inhibitor is different from that of the secretion inhibitor. The candidate substances were used to modulate the toxicity of NE release and inhibit proliferation. The candidate substance is a regulatory agent. Second, the purification of each active substance. LF11039 strain with strong activity was cultured in large quantities, 80% of the cells were extracted, and about 19mg of pale yellow crystals were obtained after 2 cycles of fermentation. The absorption maxima of this substance at 230, 252, 320 and 370nm were observed, and the molecular weight of this substance was determined by FAB-MS. 1H-NMR <13>analysis of 15 ~ 16 carbon atoms LF10512, LS8877, LS9940, etc. The final structure of the above substances is determined by the process of mechanical analysis and the substance of the active substance
项目成果
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专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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