神経伝達物質の放出過程を阻害する生理活性物質の探索とその作用の解析

寻找抑制神经递质释放过程的生理活性物质并分析其作用

基本信息

批准号：
08760069
负责人：
有岡学
金额：
$ 0.58万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

神経伝達物質の開口放出を特異的に阻害する生理活性物質を得るため、PC12細胞からの脱分極刺激に応じたノルエピネフリン(NE)放出阻害を指標としてカビおよび放線菌の培養抽出液の検索を行った。再現性よく阻害活性が認められたカビからの2サンプル(LF11039、LF10512)、および放線菌からの2サンプル(LS9940、LS8877)について、好中球からのβ-グルクロニダーゼ放出に対する作用を調べた。その結果LF11039、LF10512、LS9940はいずれも強い阻害活性を示したが、LS8877は殆ど阻害しなかった。このことから前三者は膜融合過程など調節性分泌に共通する過程の阻害剤であること、またLS8877は神経分泌に特異的な阻害剤であることが示唆された。次に最も活性の強いLF11039物質の精製を試みた。生産菌を大量培養し、菌体から80%アセトン抽出、酢酸エチル転溶を行った後、ヘキサン-メタノール系およびクロロホルム-メタノール系のシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行い、約19mgの淡黄色の結晶を得た。本物質は230、252、320、370nmの各波長に吸収極大を示し、またFAB-MSスペクトルでは、(M+Na)^+:m/z=413、(M+K)^+:m/z=429にイオンが観測され、本物質の分子量が390であることが推定された。^1H-NMRスペクトルには9個のプロトンシグナルが認められ、全て芳香環に結合したプロトンと考えられた。^<13>C-NMRスペクトルからは15〜16本のsp^2の炭素のシグナルが観測され、本物質はすべての炭素原子がSP^2である芳香族多環性物質であると考えられた。しかし最終的な構造決定には至っていないことから、引き続き精製・機器分析を行い、活性物質の構造を明らかにする予定である。

为了获得一种特异性抑制神经递质释放的生理活性物质，我们使用抑制去极化刺激的去极化刺激，搜索了霉菌和放线菌的培养物提取物，以此作为指数。研究了来自真菌（LF11039，LF10512）的两个样品，以及放线菌的两个样品（LS9940，LS8877），这些样本显示出可重复性抑制活性，以对它们对中性粒细胞从中性粒细胞释放的β-葡萄糖醛酸酶释放的影响。结果，LF11039，LF10512和LS9940均显示出强烈的抑制活性，但LS8877几乎没有抑制它。这表明前三方是调节分泌的过程的抑制剂，例如膜融合过程，而LS8877是神经分泌的特定抑制剂。接下来，尝试了最活跃的LF11039材料。将产生的细菌大量培养，从细胞中提取80％的丙酮，然后将乙酸乙酯转化为乙酸乙酯，然后使用己烷 - 甲醇和氯仿 - 甲醇在硅胶上进行柱色谱法以获得大约19 mg的浅黄色晶体。该材料在230、252、320和370 nm的波长下表现出最大吸收，而离子在（M+Na）^+：m/z = 413和（m+k）^+：m/z = 429处观察到，并且估计该材料的分子量为390。芳香环。从^<13> c-NMR频谱中，观察到15至16 sp^2碳的信号，该材料被认为是所有碳原子均为SP^2的芳族多环状材料。但是，由于尚未确定最终结构，因此将通过纯化和仪器分析进一步阐明活性物质的结构。