有毒ラン藻Microcystis属の分子分類に関する研究

有毒蓝绿藻微囊藻属的分子分类研究

• 批准号: 07760189
• 负责人: 近藤 竜二
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Fukui Prefectural University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760189/
• 关键词: Microcystis属; 16S rRNA遺伝子; RFLP; 分子分類

M.aeruginosa f.aeruginosa(NIES-87),M.aeruginosa f.flos-aquae(NIES-98),M.viridis(NIES-102),M.wesenbergii(NIES-111),M.elabens var.minor(NIES-42),M.holsatica(NIES-43)を供試生物とし,DNAの抽出方法について検討した結果、NIES-87,98,102,111(以下AERUグループとする)については細胞破砕の方法として最適なものは液体窒素処理であった。また,DNA抽出buffer等に関しては,赤潮藻類に用いられるDNA抽出bufferを使用し,CTABで精製することが肝要であった。そうして得られたDNAを鋳型として用いることにより,安定して約1.5kbpの16S rRNA遺伝子(16S rDNA)のPCR産物が得られた。これらの産物に制限酵素処理を行って断片パターン(RFLP)を調べた結果,AERUグループとNIES-42,43株との間に違いは見られたが,AERUグループには見られなかった。さらに、塩基配列を調べた結果,AERUグループ間の塩基配列の類似度は97%以上,AERUグループはNIES-42,43株間ではそれぞれ76%,84%であった。これらのことから,今回調べたMicrocystis属のうち,M.elabensとM.holsaticaの2種はAERUグループと識別できたが,AERUグループ間においては困難であった。ただ、AERUグループには、他の藍藻や細菌にはない塩基配列の保存領域があるため、様々な群集DNAからその保存領域をもとにこれらのグループをスクリーニングできることが明らかとなり,福井県三方湖の湖水からMicrocystis属AERUグループの16S rDNAの検出に成功した。

M.aeruginosa f.aeruginosa(NIES-87),M.aeruginosa f.flos-aquae(NIES-98),M.viridis (NIES-102),M.wesenbergii (NIES-111),M.elabens var.minor(NIES-42),M.holsatica(NIES-43), NIES-87, 98, 102, 111(below AERU list). The method of cell disruption is the most suitable method for liquid purification. The DNA extraction buffer is used for purification of red tide algae. The PCR product of 16S rRNA gene of about 1.5kbp was obtained. As a result of this restriction enzyme treatment,AERU strains NIES-42 and NIES-43 were found to be in the middle of the reaction. The similarity of nucleotide alignment between AERU groups was more than 97%, while that between AERU groups NIES-42 and 43 was 76%, 84% respectively. Microcystis belongs to M.elabens and M.holsatica. There are two kinds of AERU. AERU, AERU