ミクロソーム型レチノイン酸合成酵素(シトクロムP-450_<RA>)の酵素化学的特性

微粒体视黄酸合酶（细胞色素 P-450_<RA>）的酶化学特性

• 批准号: 07770085
• 负责人: 富田 修平
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Kagawa Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770085/
• 关键词: シトクロムP-450; レチノイン酸合成酵素; モノオキシゲナーゼ; レチノイド; ヘム酵素

ミクロソームのレチノイン(RA)酸合成活性を司るシトクロムP-450RA(P-450-RA)を精製し、その蛋白化学的性質を明らかにすることにより、分子レベルでのP-450RAの生体内機能(生理的役割)を解明することを本年度の目標をした。まず、RA酸合成活性を指標にP-450RAを精製した。SDS-PAGEによる分子量は、57200であった。CO-還元型のソーレー帯の分光吸収ピークは447nmであった。DLPCを用いた再構成系におけるRA酸合成活性測定の結果より、all-trans,9-cis-RAに対して、それぞれ、38.5、1.6nmol/min/nmolP-450のVmaxと11.6、8.0μMのKmを示した。また本酵素のN末アミノ酸配列(37個)の結果、本酵素はシトクロムP-4501A1(P-4501A1)と同一であることが分かった。そこでP-4501A1活性に特異的な阻害効果を示すα-naphthoflabone(α-NF)と抗P-4501A1抗体、あるいは細胞レベルにおけるRA合成活性阻害剤で知られるcitralを用いて本酵素によるRA合成活性を測定した。α-NFとcitralではKiはそれぞれ25nMと13μMを示し、抗P-4501A1抗体による阻害効果は約70%であった。また本酵素による7-ethoxycoumarinや7-ethoxyresorufinのO-deethylase活性などの薬物代謝活性もP-4501A1によるものと同等の数値を示した。以上のことより、本酵素はP-4501A1と同一であると判断した。また、生体内でのRA合成における本酵素への基質供給の調節機構のモデルとして、脂質膜および細胞内レチノール結合蛋白質(CRBP)存在下での基質(レチナ-ル)動態を検討した。脂質膜としてDLPCとphosphatidyl ethanolamineを用いて再構成実験を試みた結果、RA合成はCRBPにより負に調節されており、活性はP-4501A1の誘導により増加するという仮説がたてられた。現在この仮説をより示唆するための実験を施行している。

The activity of acid synthesis (RA) was determined by P-450RA (P-450-RA). The chemical properties of protein were analyzed by molecular chemistry, and the mechanical properties of P-450RA (physiology) were analyzed. The activity of RA acid synthesis refers to the activity of P-450RA acid synthesis. SDS-PAGE molecular weight (MW), 57200 μ m. CO- meta-type, spectral absorption, 447nm absorption, absorption and absorption. DLPC was used to determine the synthetic activity of RA acid in the regenerated line of 1.6nmol/min/nmolP-450. The results showed that the results showed that the activity of 1.6nmol/min/nmolP-450 was 11.6 and 8.0 μ M, respectively. The results showed that the activity of DNA synthesis was determined by the synthetic activity of DNA. The results of this enzyme N terminal acid column (37), and the enzyme enzyme P-4501A1 (P-4501A1) were analyzed in the same enzyme sequence. The specific inhibition of P-4501A1 activity showed that α-naphthoflabone (α-NF), anti-P-4501A1 antibody, anti-P-4501A1 antibody and anti-RA synthesis activity. α-NF, citral, Ki, 25nM, 13 μ M, anti-P-4501A1 antibody, anti-P-4501A1 antibody, anti-DNA, anti-DNA and anti-DNA. The enzyme 7-ethoxycoumarin 7-ethoxyresorufin, O-deethylase activity, P-4501A1 activity, P-4501A1 activity, enzyme activity, activity and activity. The above enzyme P-4501A1 is the same as that of the above enzyme. In vivo and in vivo, this enzyme is used for RA synthesis. This enzyme is supplied to the machinery and the lipid membrane is used to detect the intracellular enzyme binding protein (CRBP). The enzyme-binding protein is present. The lipid membrane DLPC phosphatidyl ethanolamine was used to reconstruct the results of the experiment, the synthesis of CRBP, the synthesis of CRBP, the activation of P-4501A1, and the activation of lipid. It is now necessary to instigate and instigate the implementation of the policy.

项目成果

Tsubaki,Motonari: "Electron paramagnetic resonance investigation of cytochrome P450_<C21> from bovine adrenocortical microsomes : a new enzymatic activity." Biochim. Biophys. Acta.1259. 89-98 (1995)

Tsubaki，Motonari：“牛肾上腺皮质微粒体细胞色素 P450_<C21> 的电子顺磁共振研究：一种新的酶活性。”