多様なレチノイン酸合成酵素類の同定とその特性並びに生理的役割

各种视黄酸合酶的鉴定、其特性和生理作用

• 批准号: 08670152
• 负责人: 市川 佳幸
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kagawa Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670152/
• 关键词: シトクロムP-450; レチノイン酸合成酵素; モノオキシゲナーゼ; レチノイド; ヘム酵素; レチナ-ル酸化酵素; フラビン酵素; 脱水素酵素

我々は、レチナ-ルからレチノイン酸を合成する酵素に細胞質局在の仮名レチナ-ル酸化酵素を精製単一蛋白質としその特性を調べた。その結果、レチナ-ル酸化酵素はこれまで生理作用が不明とされていたアルデヒ-ド酸化酵素と同一酵素であることを発見した。レチナ-ル酸化酵素は鉄とモリブデンをキレートした金属フラビン酵素(FAD酵素)であるが、キサンチン脱水素酵素(キサンチン酸化酵素)とは全く別の酵素である。また、細胞質には少量ではあるが、レチノイン酸を合成するレチナ-ル脱水素酵素が存在している。一方、ミクロソームにはレチナ-ルモノオキシゲナーゼ系(シトクロムP-450依存性モノオキシゲナーゼ系)が存在していることを我々は発見した。このレチナ-ルモノオキシゲナーゼ活性が3-メチルコランスレンにより誘導されることより、3-メチルコランスレン誘導のラット肝臓のミクロソームよりレチナ-ルモノオキシゲナーゼ(シトクロムP-450_<RA>)を精製し、このアイソザイムの性質を決定した。この仮称シトクロムP-450_<RA>(以下略P-450_<RA>)が3-メチルコランスレンにより著名に誘導されること、又精製したシトクロムP-450_<RA>を使用してこのシトクロムP-450依存性モノオキシゲナーゼ系の再構成系を作り、xenobioticsの代謝活性を測定した。ベンツピレンの水酸化活性が強く、又アミノ酸残基の配列、即ちシトクロムP-450_<RA>のタンパク質の1次構造並びにシトクロムP-450_<RA>の阻害実験の結果より、シトクロムP-450_<RA>がα-ナフトフラボンにより特異的に阻害されること、シトクロムP-450_<RA>のN末端より30番目のアミノ酸残基までがシトクロムP-4501A1に一致することより、レチナ-ルモノオキシゲナーゼ系は、末端酵素にシトクロムP-4501A1を持っていることを証明した。このものはミクロソーム局在のアルデヒド酸化酵素(MAIDO)的働きをするシトクロムP-450(CYP2Cファミリー)との異同について検討中である。

I 々 は, レ チ ナ - ル か ら レ チ ノ イ を ン acid synthesis す る enzyme に cytoplasm bureau in の 仮 name レ チ ナ - を refined 単 ル acidification enzyme protein と し そ の features を adjustable べ た. そ の results, レ チ ナ - ル acidification enzyme は こ れ ま で physiology が unknown と さ れ て い た ア ル デ ヒ - ド acidification enzyme と same enzyme で あ る こ と を 発 see し た. レ チ ナ は iron objects - ル acidification enzyme と モ リ ブ デ ン を キ レ ー ト し た metal フ ラ ビ ン enzyme (FAD) enzymes で あ る が, キ サ ン チ ン dehydrated vegetable enzyme (キ サ ン チ ン acidification enzyme) と は く all don't の enzyme で あ る. ま た, cytoplasmic に は small で は あ る が, レ チ ノ イ を ン acid synthesis す る レ チ ナ - ル dehydrated vegetable enzyme が exist し て い る. Party, ミ ク ロ ソ ー ム に は レ チ ナ - ル モ ノ オ キ シ ゲ ナ ー ゼ system (シ ト ク ロ ム P - 450 dependency モ ノ オ キ シ ゲ ナ ー ゼ department) exist が し て い る こ と を I 々 は 発 see し た. こ の レ チ ナ - ル モ ノ オ キ シ ゲ ナ ー ゼ active が 3 - メ チ ル コ ラ ン ス レ ン に よ り induced さ れ る こ と よ り, 3 - メ チ ル コ ラ ン ス レ ン induced の ラ ッ ト routine liver の ミ ク ロ ソ ー ム よ り レ チ ナ - ル モ ノ オ キ シ ゲ ナ ー ゼ (シ ト ク ロ ム P - 450 _ < RA >) を refined し, こ の ア イ ソ ザ イ ム を definitely の properties Fix た. こ の 仮 said シ ト ク ロ ム _ < RA > P - 450 (P - 450 _ < RA > slightly below) が 3 - メ チ ル コ ラ ン ス レ ン に よ り famous に induced さ れ る こ と and refined し た シ ト ク ロ ム P - 450 _ < RA > を use し て こ の シ ト ク ロ ム P - 450 dependency モ ノ オ キ シ ゲ ナ ー ゼ is の reconstitution を り, x enobiotics <s:1> metabolic activity を assay た た ベ ン ツ ピ レ ン の strong acidic active が く and ア ミ ノ acid residues の columns, namely ち シ ト ク ロ ム P - 450 _ < RA > の タ ン パ ク qualitative の one structure and び に シ ト ク ロ ム P - 450 _ < RA > の resistance against be 験 の results よ り, シ ト ク ロ ム P - 450 _ < RA > が alpha ナ フ ト フ ラ ボ ン に よ り specific に resistance against さ れ る こ と, シ ト ク ロ ム P - 450 _ < RA > の N terminal よ り 30 times eye の ア ミ ノ acid residues ま で が シ ト ク ロ ム P - 4501 - a1 に consistent す る こ と よ り, レ チ ナ - ル モ ノ オ キ シ ゲ ナ ー ゼ は, end enzyme に シ ト ク ロ ム P - 4501 - a1 を hold っ て い る こ と を prove し た. こ の も の は ミ ク ロ ソ ー ム bureau in の ア ル デ ヒ ド acidification enzyme (MAIDO) 働 き を す る シ ト ク ロ ム P - 450 (CYP2C フ ァ ミ リ ー) と の similarities and differences between に つ い て 検 beg in で あ る.

项目成果

Okuyama,Eisaku: "A novel mutation in the cytochrome P-450_<27> (CYP27) gene caused cerebrotendinous xanthomatiosis in a Japanese family." J.Lipid Res.37. 631-639 (1996)

Okuyama,Eisaku：“细胞色素 P-450_<27> (CYP27) 基因的一种新突变导致日本一个家族的脑腱黄瘤病。”

Furukawa,Aizo: "cDNA cloning of sheep and goat NADPH-adrenoferredoxin reductases and identification of a Novel alternative splicing variant in sheep adrenocortices." Anim.Reprod.Biotechnol.Lab.(in press). (1997)

Furukawa,Aizo：“绵羊和山羊 NADPH-肾上腺素铁氧还蛋白还原酶的 cDNA 克隆以及绵羊肾上腺皮质中新型选择性剪接变体的鉴定。”

Ohnishi,Taira: "Direct inhibitions of the activities of steroidogenic cytochrome P-450 monooxygenase systesm by anticovulsants." J.Steroid Biochem.Molec.Biol.(in press). (1997)

Ohnishi,Taira：“抗惊厥药直接抑制类固醇生成细胞色素 P-450 单加氧酶系统的活性。”