DNAハイブリダイゼーションを目的としたbispecific単クローン抗体の作製

用于 DNA 杂交的双特异性单克隆抗体的生产

• 批准号: 07770309
• 负责人: 青木 康博
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770309/
• 关键词: Monoclonal antibody; Thymine dimer; Enzyme immunoassay; Hybrid hybridoma; Bispecific antibody; DNA hydridization

非放射性物質標識による核酸の検出を容易に行うことを目的として、チミン・ダイマーおよびペルオキシダーゼに特異的なbispecific抗体の開発を試みた。報告者は抗ペルオキシダーゼ抗体産生細胞株は確立・保持していたが、抗チミンダイマー抗体産生細胞株を保有していなかったため、単クローン抗チミン・ダイマー抗体を作製した。抗原にはサケ精子DNAに紫外線を照射してチミン・ダイマー化したものを用いBALB/Cマウスを免疫し、脾細胞をX63-Ag8-653と融合した。その結果数株のIgGおよびIgM抗体産生細胞を得たが、dot ELISA法でサケ精子DNAに対しても抗体活性を示すものが多く、特異性の高い株の再クローニング等を行っており、チミン・ダイマー化したブローブの検出に関しての検討は十分になしえなかった。一方合成DNA(ATTT)_5にUV照射したもの抗原としてin vitro免疫・細胞融合により抗チミン・ダイマー抗体作製を試みたが、抗体産生細胞株確立には至らなかった。これと並行して4量体によるbispecific抗体産生細胞株作製法について抗ペルオキシダーゼ抗体産生細胞株(P445)および抗A単クローン抗体産生細胞株(2A1)を用いて検討した。後者をウワバイン含有培地で馴化培養し、10^<-3>ウワバインに対する耐性株を選択し、さらに100μg/mlまでの6-アミノメルカプトプリン含有培地にて順次培養し、HAT感受性株を選択して前者と融合した。融合後一時的にbispecificityを有する細胞の発育が認められたが、経代培養中に抗体産生能を失うものが多かった。ハイブリドーマ同士の融合は、融合効率・増殖環境等に改良の余地があると考えられた。

The identification of non-radioactive substances is easy to carry out, and the development of bispecific antibodies is very important. The reporter established and maintained anti-virus antibody-producing cell lines, and maintained anti-virus antibody-producing cell lines. Antigen: Sperm DNA: UV irradiation: BALB/C: Splenocytes: X63-Ag8 -653: Fusion As a result, several strains of IgG and IgM antibody producing cells were obtained and dot ELISA assay was used to detect the activity of antibody against sperm DNA. A synthetic DNA(ATTT)_5 is irradiated with UV and the antigen is produced in vitro. Cell fusion is used to produce anti-DNA antibodies. Antibody-producing cell lines are established. The method for producing bispecific antibody-producing cell lines in four different quantities is described in detail below. The latter is selected from the group consisting of resistant strains cultured in culture medium at 100 <-3>μ g/ml, 6-resistant strains cultured in culture medium at 100μg/ml, HAT susceptible strains selected from the group consisting of resistant strains cultured in culture medium at 100μg/ml, and HAT susceptible strains selected from the group consisting of resistant strains at 100 μ g/ml. After fusion, bispecific activity was observed in cell development, and antibody production was observed in culture. There is room for improvement in the fusion rate and growth environment.

项目成果

Nagae M, Aoki Y,Nata M,Hashiyada M,Sagisaka K: "Monoclonal antibody against an amniotic protein carrying ABH blood group epitops and its forensic application" Tohoku J Exp Med. 177. 140-146 (1995)

Nagae M、Aoki Y、Nata M、Hashiyada M、Sagisaka K：“针对携带 ABH 血型表位的羊膜蛋白的单克隆抗体及其法医应用”Tohoku J Exp Med。