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ラットMUC2mucin遺伝子のクローニングとプロモーターの機能的解析

大鼠MUC2mucin基因克隆及其启动子功能分析

基本信息

批准号：
07770443
负责人：
大森久光
金额：
$ 0.51万
依托单位：
University of Occupational and Environmental Health, Japan
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770443/
关键词：
Mucin MUC2 プロモーター

项目摘要

気道分泌亢進における気道上皮杯細胞および粘液細胞の病的増加には、Mucin遺伝子の発現が重要な役割を果たしており、この発現調節機構を探るため、気道と腸管で発現するラットMUC2 mucin cDNAおよびgenomic DNAをクローニングした。ラットMUC2 mucin遺伝子プロモーター領域には、TATA boxおよびSP-1,NF-kB,AP-1などの転写制御因子の認識可能なエレメントを認めた。Mucin遺伝子の転写調節機構について検討するため、遺伝子上流域のプロモーター活性をCAT assayを用いて調べた。転写開始点より上流859bpより順次欠失させたプロモーター領域をレポータープラスミドとしてクロラムフェニコールアセチル化酵素(CAT)の上流に接続し、ムチン産生ヒト大腸腺癌細胞株(HM3胞)、自然にトランスフォームしたラット気管上皮細胞株(SPOC1細胞)およびネガティブコントロールとしてマウス線維芽細胞(NIH3T3細胞)にエレクトロポレーション法によりトランフェクションしCAT assayを行った。腸管において、プロモーター活性はプロモーターの方向性に依存することがわかった。859bpより295bpさらに、186bpまで欠失させるとCAT activityは低下し、転写開始点より上流の295bpから186bpまでの間には転写活性を正に制御する領域(positive acting region)の存在が示唆された。98bpより3'側の部位には基本調節エレメントの存在が示唆された。ラットの気管上皮細胞であるSPOC1細胞においては、腸管とは違うパターンの活性を認め、98bpより上流には転写に対し抑制的に働く因子の存在が示唆された。気管において、98bpより下流の領域が転写活性に重要な役割を持っていると考えられた。これらの結果より、rMUC2ムチンは腸管と気管においてそれぞれ異なる組織特異的転写調節機構が存在する可能性が考えられた。

The increase of disease in epithelial goblet cells and mucus cells due to hypersecretion of the gut is an important factor in the development of Mucin gene. The regulatory mechanism of this development is explored. MUC2 mucin cDNA and genomic DNA are also found in the gut. MUC2 mucin gene transfer domain, TATA box, SP-1,NF-kB,AP-1, control factor, recognition possibility, etc. Mucin gene regulation mechanism is used to regulate CAT assay activity in the upper basin of the gene. The upstream 859bp sequence of the start point of the transcription sequence is the upstream 859 bp sequence of the upstream The CAT assay was performed on a natural vascular epithelial cell line (SPOC1 cells). The activity of the intestine depends on the orientation of the intestine. The presence of a positive acting region between 859bp and 295bp, 186bp and 295bp upstream of CAT activity and 186bp upstream of CAT activity start point indicates the presence of a positive acting region. 98bp 3'side of the site is the basic regulation of the existence of the signal The activity of SPOC1 cells was detected in the upper part of the intestine and the lower part of the intestine. The expression of SPOC1 cells was detected in the upper part of the intestine. The 98bp downstream domain is the most important domain in the world. The results suggest that there is a possibility of tissue-specific regulatory mechanisms in the gut.