血管平滑筋細胞の蛋白ケロシンリン酸化反応とその機能

血管平滑肌细胞蛋白煤油磷酸化反应及其功能

• 批准号: 07770497
• 负责人: 清水 寛正
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: 福井医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770497/
• 关键词: 血管平滑筋細胞; 蛋白チロシンリン酸化反応; チロシンキナーゼ; 平滑筋増殖

1、ラット大動脈由来単離培養血管平滑筋細胞(SMC)をG0期に同期させた後に、PDGF(1-10ng/ml)を添加し、^3H-thymidineの取り込みを測定することによりSMCの増殖能を評価したところ、その取り込みは濃度依存性に増加した。また抗リン酸化チロシン単クローン抗体によるウエスタンブロット分析によりSMCの蛋白チロシンリン酸化反応(PTP)を評価したところ、PDGFの添加はSMCに22、25、160kDの分子量のPTPを引き起こした。2、phosphotyrosine phosphatase inhibitorであるvanadate(1-10μM)の添加によっても^3H-thymidineのSMCへの取り込みは濃度依存性に増加した。さらにPDGFとvanadateを同時添加すると、おのおの単独投与に比較し相乗的な細胞増殖作用を示した。またvanadateはPDGFによるSMCのPTPを促進した。3、tyrosine kinase inhibitorであるgenistein存在下で上記と同条件の反応を検討したところ、これらの単独及び同時添加による細胞増殖作用はいずれもgenistein添加により濃度依存的に抑制された。さらにgenisteinはSMCのPTPも濃度依存的に抑制した。4、またvanadateは平滑筋増殖抑制作用を有するPGI2やnitric oxide(NO)の産生を増加させ、genisteinにより抑制された。この結果から、平滑筋におけるチロシンリン酸化反応は、増殖促進機構だけでなく生理活性物質の産生調節による増殖抑制機構にも関与しており、平滑筋増殖調節に密接に関与していることが示された。

1. The proliferation of vascular smooth muscle cells (SMC) was evaluated in a concentration-dependent manner by adding PDGF(1-10ng/ml) to the isolated SMC at G0 phase. Anti-protein kinase antibodies were analyzed for protein kinase (PTP) in SMC and PDGF were added for molecular weight PTP of SMC 22, 25 and 160kD. 2. Phosphotyrosine phosphatase inhibitor increased in a concentration-dependent manner with the addition of vanadate(1-10μM). The addition of PDGF and vanadate simultaneously demonstrates the effects of cell proliferation on cell growth. VANADATE PROMOTION OF SMC 3. In the presence of tyrosine kinase inhibitor and genistein, cell proliferation was inhibited by concentration dependent inhibition. The genistein is a concentration-dependent inhibitor of SMC. 4. Vanadate inhibits the proliferation of PGI2 and nitric oxide(NO). As a result, the regulation of the production of physiologically active substances by the growth inhibition mechanism is closely related to the regulation of the smooth muscle growth.