ミュウタントアレレ特異的プローブによるXb+型慢性肉芽腫症の家系調査

使用突变等位基因特异性探针对 Xb+ 慢性肉芽肿病进行系谱研究

• 批准号: 07770555
• 负责人: 伊藤 善也
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Asahikawa Medical College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 1996
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770555/
• 关键词: 慢性肉芽腫症; gp91-phox; チトクロームb; allele-specific oligonucleotide probe; 家系調査; genomic DNA

Gp91-phox遺伝子に変異を認めたチトクロームb_<558>陽性の慢性肉芽腫症の遺伝子診断および遺伝子診断に基づく家系調査を行い得た。遺伝子診断は、遺伝子解析の結果判明したx染色体上のgp91-phoxの変異部位を含んだmutant allele specific oligonucleotide probe (ASO)を用いて試みた。変異部位を含む約100base pairの部分をgenomic DNAから増幅し、Northern blotを行い、biotinでラベルしたASOをhibridizeさせた後、化学発光法によりバンドの検出を行なった。その結果、正常遺伝子と異常遺伝子を明確に区別することができた。このprimer set とprobeを用いて患者、患者の妹、母親、母方の姉、母方の祖父、祖母についてのDNA診断を行った。その結果、患者の妹、母親の姉、祖父は正常遺伝子のみを有しており、母親および祖母は、正常と異常の遺伝子を有していることが明らかとなった。異常遺伝子は母方祖母、母親そして患者に受け継がれていることが明らかとなった。この方法は、PCRにてgenomicから当該遺伝子を増幅するので少量のDNAがあれば可能である、従って少なくともこの家系に関しては羊水診断も可能である。

Gp91-phox遺伝子に変異を認めたチトクロームb_ < 558 >陽性の慢性肉芽腫症の遺伝子診断および遺伝子診断に基づく家系調査を行い得た。遺伝子診断は,遺伝子解析の結果判明したx染色体上のgp91-phoxの変異部位を含んだ突变等位基因特定寡核苷酸探针(麻生太郎)を用いて試みた。変異部位を含む約100碱基对の部分を基因组DNAから増幅し,北部污点を行い,生物素でラベルした麻生太郎をhibridizeさせた後,化学発光法によりバンドの検出を行なった。★★★★★★★★★★★★★★★★★この引物组と探针を用いて患者,患者の妹,母親,母方の姉,母方の祖父、祖母についてのDNA診断を行った。その結果,患者の妹,母親の姉、祖父は正常遺伝子のみを有しており,母親および祖母は,正常と異常の遺伝子を有していることが明らかとなった。“”“”“”“”“”“”“”“”“”“”“”“”“”“”“”“”この方法は,PCRにて基因组から当該遺伝子を増幅するので少量のDNAがあれば可能である,従って少なくともこの家系に関しては羊水診断も可能である。