「シワ」のメカニズムに関する基礎的研究-cutis laxa及びin vivo, in vitro及び老化線維芽細胞におけるコラゲナーゼ遺伝子転写調節機構の解析-

皱纹机制基础研究 - 皮肤松弛及体内、体外及衰老成纤维细胞胶原酶基因转录调控机制分析 -

• 批准号: 07770713
• 负责人: 森 健一
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Kawasaki Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770713/
• 关键词: cutis laxa; 線維芽細胞; コラ-ゲナーゼ; 転写; TPA-responsive element; プロモーター

1.cutis laxa患者皮膚より初代培養を行った3株の真皮由来線維芽細胞と、性・年齢をマッチさせた正常人皮膚のそれとを比較したところ、cutis laxa由来ではコラ-ゲナーゼ、ストロムライシンmRNAレベルの3〜5倍の増加が認められた。また本症由来線維芽細胞3株を用いたnuclear run-off法でも、正常と比較して3〜5倍のコラ-ゲナーゼ遺伝子転写活性の増加が認められた。2.コラ-ゲナーゼ遺伝子の転写活性の増加が著しい細胞株で、コラ-ゲナーゼ・プロモーター遺伝子(-500〜+55)にchloramphenicol acetyltransferase (CAT)遺伝子を結合した発現ベクター(pKCAT)を用いたtransient expression assayを行ったところ、約5倍の活性増加がみられた。さらに-244, -98塩基までプロモーターを欠失しても、依然5倍前後の活性増加が認められた。3.本遺伝子の-73〜-64塩基に位置するTRE (TPA-responsive element)の1部をmutationして、CAT assayを行ったところCAT活性の増加がみられなくなった。gel retardation法により同量の各蛋白を用いて比較したところ、CCAAT結合活性は同レベルであったが、AP-1結合活性は本症由来線維芽細胞で増加していた。以上より、cutis laxa由来線維芽細胞におけるコラ-ゲナーゼのmRNAレベルの上昇は、その転写レベルが増加するためであることが明らかとなった。またそれはTREを介しAP-1結合の活性化によりなされることが示唆された。

In the primary culture of 1.cutis laxa patients, 3 strains of dermis were obtained from the origin of germ cells, sexual age, normal skin, cutis laxa, mRNA, and so on. Three strains of germ cells from the cause of the disease were detected by nuclear run-off method, and the activity was increased by 3 times as much as that of normal cells. two。 The cell line, the cell line, the chloramphenicol acetyltransferase (CAT), the cell line (- 500), the cell line (- 500), the cell line, the cell line, the cell It is still 5 times as active as before and after that, and the activity is still 5 times higher than that of the previous one. 3. This book is based on the location of TRE (TPA-responsive element), the location of mutation, the line of CAT assay, the activity of CAT, and the location of CAT assay. The same amount of protein was detected by gel retardation method, and the activity of CCAAT binding was the same as that of AP-1. The origin of the disease was determined by cell culture. The origin of the above cutis laxa is related to the cause of the disease. This is the reason why you need to write a message on the mRNA computer. This is an example of how to use TRE to introduce AP-1 combined with activation information.