权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

複製変異型ヘルペスウイルスベクターを用いたL1遺伝子導入による中枢神経再生の促進

使用复制突变型疱疹病毒载体导入L1基因促进中枢神经系统再生

基本信息

批准号：
07771119
负责人：
矢崎貴仁
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771119/
关键词：
Herpes simplex virus L1 neural regeneration astrocyte neurite cutgrowth cell migration

项目摘要

中枢神経系は一般的に再生能に乏しく、そのことが神経外傷・脳卒中・外科的手術後の機能予後を低下させている。我々は以前から、神経系に発現する細胞接着分子に着目し、中枢神経系の再生促進への応用を目指している。本研究では、将来の臨床応用を念頭に置き、神経親和性の高い単純ヘルペスウイルスを用い、毒性を極力低下させた複製変異型ベクターを構築した。同ベクターに、形質転換細胞実験系(in vitro)で既に神経再生促進効果を見い出しているL1蛋白のcDNAを組み込み、元来L1を発現していない初代培養系ラットアストロサイトに遺伝子導入したところ、CMVプロモーターにより高い発現効率が得られ、またグリア細胞特異的GFAPプロモーターにより長期発現が得られた。次にL1を強制発現させたラット胎生20日目のアストロサイトをフィーダーレイヤーにして、ラット生後1日目の小脳顆粒細胞を共培養したところ、L1を発現したアストロサイト上で、有意に神経突起伸展の促進が観察された。また、小脳顆粒細胞の再凝集を作成し同様に共培養したところ、やはりL1を発現したアストロサイト上で、神経細胞の移動が有意に促進された。これらはいずれも神経再生にとって重要な機能であり、我々の開発した複製変異型ヘルペスウイルスベクターを用いて、初代培養系でこれが立証されたことは、今後のin vivo実験、さらには臨床応用へ向けて、大変意義深いものと考えられる。また、本実験系でフィーダーレイヤーに用いたアストロサイトにおいては、L1を発現している細胞数は約30%のみであるにも関わらず、突起伸展や細胞移動は均一に促進されることから、細胞-細胞の相互接着だけでなく、何らかの情報伝達系が機能していることが予想される。そこでbasicFGF受容体を介するsecondmessenger系の阻害剤を加えたところ、両者ともに部分抑制された。このことにより一部はbasicFGF受容体を介する情報伝達系が関与していることが示唆された。今後はin vivo脊髄損傷モデルを用いて神経再生を検討して行きたいと考えている。

The central nervous system is generally deficient in regenerative energy, and its function after neurotrauma, stroke, and surgery is reduced. We have previously focused on the use of cell adhesion molecules found in the nervous system to promote the regeneration of the central nervous system. This study aims to establish a high level of neuroaffinity and low toxicity for future clinical use. In vitro, L1 protein cDNA was assembled, L1 gene was detected, and in primary culture, CMV gene was introduced with high detection rate, and cell-specific GFAP gene was detected for a long time. L1 was found in co-culture of granulosa cells on the 20th day after birth, and L1 was found on the 20th day after birth. The reaggregation of micro-granular cells was co-cultured in the same way, and the migration of neurocytes was intentionally promoted. This is the first time that we have ever seen such a phenomenon. The number of cells in this system is about 30%. The second messenger system is partially inhibited by the addition of a basicFGF receptor. This is a part of the basicFGF receptor. In the future, we'll be able to use this method to regenerate the brain.