犬遠位尿細管株を用いた尿路結石形成におけるオステオポンチンの関与の検討

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(目的)MDCK細胞のオステオポンチン(以下OPN)蛋白分泌作用、蓚酸カルシウム(以下CaOX)結晶沈着能より、MDCK細胞にOPN蛋白を添加、CaOX結晶を反応させ、その結晶沈着程度を確認した。またOPN蛋白を特異的に2つに分割させるトロンビンを結晶沈着前処理として添加、同時に結晶沈着程度を検討した。(方法)MDCK細胞をconfluent状態まで培養し、ヒト母乳より作製したOPN蛋白100μg/ml、トロンビン10unit/mlを加え、24時間培養した。その後^<45>塩化カルシウムにてlabelingしたCaOX結晶溶液をMDCK細胞に加え、2分間反応させた。PBS溶液にて洗浄後trypsine処理し、アイソトープにて沈着結晶量を測定した。(結果)前処置を行っていないコントロール群に比べ、OPN添加群では有意に結晶沈着量増加を認めた。トロンビン添加群は、コントロール群に比べ有意差はなかったが減少傾向にあった。OPN添加群に比べ有意に結晶沈着の減少を認めた。(考察)OPN蛋白は、骨の重要な石灰化促進因子として知られている。私達はカルシウム含有尿路結石内に発見し、骨と同様尿路結石の促進因子として注目した。今回OPN蛋白添加により結晶沈着の増加、トロンビン添加によりOPNを分割、その活性を抑制させる事により、沈着量減少を認めた。以上より、犬の遠位尿細管細胞であるMDCK細胞の結晶沈着においてOPNが重要な役割を果たしていることが推察された。また同細胞はヒト遠位尿細管細胞とin vivoの状態をより反映しており、今回の結果は、今後の尿路結石形成におけるOPNの役割を評価するうえで重要な結果と考えた。