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抗体/DNA接合分子を用いた網膜芽細胞腫の遺伝子治療

使用抗体/DNA 偶联分子进行视网膜母细胞瘤基因治疗

基本信息

批准号：
07857126
负责人：
大竹雄一郎
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

網膜芽細胞腫や悪性黒色腫などの眼内腫瘍の保存的療法として、遺伝子治療が注目されている。本研究ではこの可能性を検討するため、上皮増殖因子レセプター(EGFR)に結合後エンドサイトーシスされると特異的なモノクローナル抗体(B4G7)を、ポリリジンを介してDNAと結合させた複合体"イムノジーン"を用いて、EGFR発現細胞に選択的に遺伝子を導入する方法を試みた。B4G7抗体およびそのFab断片を、それぞれβガラクトシダーゼ(β-gal)遺伝子と結合したイムノジーンを作製し、EGFRを過剰産生する培養偏平上皮癌細胞(A431)を対照として、培養網膜芽細胞腫細胞(Y79)に対するβ-gal遺伝子導入を検討した。Fabイムノジーンでは、A431への導入効率がB4G7抗体イムノジーンよりも数十倍優れていた。このFabイムノジーンを用いてY79および正常網膜色素上皮細胞への遺伝子導入を試みたが、両細胞のEGFR発現量が細胞あたり約10^4個と低いために、β-gal遺伝子の導入・発現は認められなかった。さらに、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ(HS-TK)遺伝子を腫瘍細胞に導入し、その後ガンシクロビル(GCV)投与して、腫瘍細胞を選択的に排除する方法を検討した。A431については、数%の細胞にHS-TK遺伝子を導入すれば、by stander効果により、ほぼすべての細胞が死滅した。しかしY79および正常網膜色素上皮細胞では、有意な殺細胞効果を認めなかった。一方、EGFRを比較的多く発現している悪性黒色腫細胞(G361)について、同様の実験を行った。イムノジーンによるβ-gal遺伝子導入・発現はA431の1/10程度に観察された。HS-TK遺伝子を導入した場合には、有意な殺細胞効果を確認した。したがってイムノジーン法は、眼内腫瘍、特に悪性黒色腫に有効で、生体内ターゲッティング可能な遺伝子療法として期待される。

The treatment of retinal germ cell edema and intraocular swelling is of great importance. In this study, we investigated the possibility of introducing a specific EGFR antibody (B4G7) into EGFR cells after binding to EGFR, and the use of EGFR as a mediator for DNA binding complexes. B4G7 antibody and Fab fragments were used to control β-gal gene binding and EGFR production in cultured epithelial carcinoma cells (A431) and β-gal gene introduction in cultured omental blastoma cells (Y79). Fab antibody introduction rate is tens of times better than that of A431 antibody. The gene expression of EGFR in retinal pigment epithelial cells was tested by using Y79 and EGFR gene expression in normal retinal pigment epithelial cells. The number of EGFR gene expression in retinal pigment epithelial cells was about 10^4. This paper discusses the methods of introducing and rejecting HS-TK gene into tumor cells and GCV gene into tumor cells. A431 is a virus that can cause HS-TK genes to be introduced into, and killed by stander. Y79 is a normal retinal pigment epithelial cell. One side, EGFR, more than one side, EGFR, more than one side, EGFR, EGFR The introduction and development of β-gal gene in the first phase of A431 was observed at a level of 1/10. HS-TK gene is introduced to confirm the effect of intentionally killing cells. The treatment of ocular edema and specific melanoma is effective and may be expected in vivo.