緑内障原因遺伝子ミオシリンの視神経グリア細胞における機能解析

视神经胶质细胞中引起青光眼的基因 myocilin 的功能分析

• 批准号: 13771044
• 负责人: 大竹 雄一郎
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771044/
• 关键词: ミオシリン; MYOC; 視神経; 神経グリア細胞; 正常眼圧緑内障; 遺伝子; 遺伝; 神経膠細胞

インフォームドコンセントを得た後に、80名の正常眼圧緑内障患者から血液を採取し、ミオシリン遺伝子変異について解析した。SSCP法によりスクリーニングを行い、変異が疑われたサンプルについて直接シークエンシング法にて遺伝子配列を決定した結果、アミノ酸置換を呈する1つの変異と8つの多型を認めた。Asp208Glu変異家系では、ミオシリン変異と正常眼圧緑内障の表現型が家系内で一致していた。この変異は、健常者60名には認められなかった。ブタ摘出眼球を材料とし、作製したポリクロナール抗体を用いて、視神経周囲組織におけるミオシリン発現を免疫組織学的に検討した。光顕像において、抗ミオシリン抗体の染色像が、抗Glial Fibrillary Acidic Protein抗体を用いた部位と一致したことから、ミオシリンが視神経乳頭部におけるグリア(astrocyte)に局在していることが確認された。さらに免疫電顕像によりグリア細胞内の核周囲・粗面小胞体・ミトコンドリアおよびグリア線維に陽性反応を認め、特にグリア細胞突起の内境界膜終息部やグリア同士の間や神経・血管との接着部位に多く発現していることが判明した。次にブタ眼球から培養した、視神経乳頭周囲グリア細胞を用いて、リポフェクション法にてAsp208Glu変異ミオシリンを導入発現させた。細胞内のミオシリン局在を光学顕微鏡および免疫電顕法により観察したが、非導入細胞に比較して明らかな差異は認めなかった。またCos-1細胞に変異ミオシリンを導入発現させると、多型では正常と同様に分泌されるのに対し、開放隅角緑内障の原因変異では培養上清に分泌されない。一方Asp208Glu変異ミオシリンではCos-1細胞により正常に分泌されたことから、開放隅角緑内障の機序と異なり、正常眼圧緑内障においてはミオシリンが分泌タンパクとして作用しているのではないと推察された。

インフォームドコンセントをReceived a green cataract in 80 patients with normal eye pressure The patient's blood was collected and analyzed. SSCP method is the same as the original method, and the original method is direct The result of グ法にて缝子array is determined, and the result of アミノacid replacement is する1つの変different と8つのmultitypeをidentificationめた. Asp208Glu is different in different families, and the phenotype of Mirena is different in normal eye pressure green cataract, so it is consistent in the family.この変は、60 healthy people recognized by められなかった. The eyeball removal materials are made from the same materials, and the antibodies used to make the eyeballs are made from the same materials. Optoelectronic peripheral tissue and immunohistology. Anti-Microantibody staining image, Anti-Glial Fibrillary Acidic Protein antibodies are used for the same parts of the body and the したことから. The head of the head is confirmed by the astrocyte.さらにimmunoelectroencephalogram によりグリアIntracellular perinuclear envelope・rough surface cell body・ミトコンドリアおよびグリアline dimension にpositive reaction をidentificationめ, specialにグリアThe inner boundary membrane terminal part of the cell process やグリア同士の间や神経・The blood vessel とのconnection part に多く発appears していることが clarifies した. The eyeballs are cultivated by the submersible eyeballs, and the optic nerve papillary peripapillary cells are used by the same ones.ェクション法にてAsp208Glu変isoミオシリンを Import発行させた. Intracellular localization was detected using optical microscopy and immunoelectrometry, and non-introduced cells were compared to identify the difference.またCos-1 cells are introduced into different に変ミオシリンを and are now させると, polytype ではnormal と同様The secretion of secretion and the cause of open green cataract are different. The secretion of culture supernatant is different. One side Asp208Glu isomeric Cos-1 cells have normal secretion and open green cataract. Mechanical sequence and normal eye pressure green cataract においてはミオシリンがThe role of the secretion of the secret is the role of the secret.