緑内障における線維柱帯ミオシリンの機能解析

小梁肌纤蛋白在青光眼中的功能分析

• 批准号: 11771073
• 负责人: 大竹 雄一郎
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771073/
• 关键词: ミオシリン; MYOC; 線維柱帯; 開放隅角緑内障; 正常眼圧緑内障; 遺伝子; 遺伝; 緑内障; TIGR; 遺伝子変異

インフォームドコンセントを得た後に緑内障患者の手術から得られた線維柱帯組織を材料とし、当教室で作成したポリクロナール抗ミオシリン抗体を用いて免疫組織学的にその局在を検討した。光顕像では、ミオシリン抗体により線維柱帯組織全体にわたり梁構造がほぼ均一に染色された。またin situ hybridizationにより、線維柱帯細胞の核周囲に陽性反応を認めたことから、ミオシリン遺伝子が線維柱帯細胞で転写・発現していることが判明した(Curr Eye Res,2000)。さらに、免疫電顕法により、線維柱帯細胞において生成されたミオシリンが細胞内に分布していることが判明した。正常眼と開放隅角緑内障眼、ステロイド緑内障眼の線維柱帯組織を同様の方法で比較したが、ミオシリン発現強度と緑内障病型との相関は認めなかった。一方、日本人緑内障患者におけるミオシリン遺伝子変異について、開放隅角を呈する緑内障患者140名について解析した結果、アミノ酸置換を呈する4つの変異と6つの多型を認めた。ミオシリン変異を伴う開放隅角緑内障の頻度は2.9%であり、過去の報告と同様の頻度であった(Human Mutation,2000)。Asp208Glu変異家系では、正常眼圧緑内障を呈しており、ミオシリン変異と表現型が家族内で一致していた。Ile360Asn変異家系においては、原発開放隅角緑内障と高眼圧症と正常者が混在しており、同一のアミノ酸変異であっても表現型が異なる可能性があることを報告した(第11回緑内障学会)。培養ウシ線維柱帯細胞を用いて、細胞培養上清に分泌されたミオシリンタンパクを先の抗ミオシリン抗体を用いたウエスタンブロット法により検出した。500nMのデキサメサゾンを培養細胞に添加すると、上清のミオシリン分泌量は増強した。現在、デキサメサゾン添加時のウシ線維柱帯細胞の形態的変化とミオシリンの細胞内局在を、免疫電顕法を用いて引き続き検討中である。

イ ン フ ォ ー ム ド コ ン セ ン ト を have た の に glaucoma patients after surgery か ら have ら れ た line d column 帯 を material と し, when the classroom で し た ポ リ ク ロ ナ ー ル resistance ミ オ シ リ を ン antibody with い て immune histological に そ の bureau in を beg し 検 た. The light 顕 image で and the <s:1> シリ シリ シリ <s:1> antibody によ the entire にわた beam structure of the linear columnar tissue がほぼ is uniformly に stained された. ま た the in situ hybridization に よ り の column, line d 帯 cell nuclear weeks 囲 に positive anti 応 を recognize め た こ と か ら, ミ オ シ リ ン posthumous son 伝 が で 帯 cell line d column planning, write 発 now し て い る こ と が.at し た (Curr Eye Res, 2000). さ ら に, immune 顕 method に よ り column, line d 帯 cells に お い て generated さ れ た ミ オ シ リ ン が に distribution in the cell し て い る こ と が.at し た. Normal eyes と open Angle glaucoma eyes, ス テ ロ イ ド glaucoma eyes の を 帯 organization with others in line d column の way で compare し た が, ミ オ シ リ ン 発 now strength と glaucoma disease type と の phase masato は recognize め な か っ た. Party, Japanese patients with glaucoma に お け る ミ オ シ リ ン heritage 伝 sub - different に つ い て, open Angle を す る 140 glaucoma patients に つ い て parsing し た results, ア ミ ノ acid replacement を show す る 4 つ の - different と 6 つ の polymorphism を recognize め た. ミ オ シ リ ン - different を with open Angle glaucoma う の frequency は 2.9% で あ り, past と の report with the others in の frequency で あ っ た (Human Mutation, 2000). Asp208Glu - different family で は, normal eye 圧 glaucoma を show し て お り, ミ オ シ リ ン - different と phenotype が で consistent within the family し て い た. Ile360Asn - different family に お い て は, primary open Angle glaucoma 発 と high normal eye 圧 disease と が mixed し て お り, same の ア ミ ノ acid - different で あ っ て も phenotype が different な る possibility が あ る こ と を report し た glaucoma (11 back to learn). Cultivate ウ シ line d column を 帯 cells using い て secretion, cell culture supernatant に さ れ た ミ オ シ リ ン タ ン パ ク を の first fight ミ オ シ リ を ン antibody with い た ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ ト method に よ り 検 out し た. 500nM <s:1> デキサメサゾ を を を cultured cells に with the addition of すると and supernatant <s:1> を <s:1> <s:1> <s:1> secretion amount <e:1> increased by <s:1> た た. Now, デ キ サ メ サ ゾ ン when adding の ウ シ 帯 cell line d column の morphological variations of と ミ オ シ リ ン の bureau in cells in を, immune 顕 method を い て lead き 続 き 検 beg in で あ る.

项目成果

Kubota Ryo: "Nobel mutations in the myocilin gene in Japanese glaucoma patients"Human Mutation. 16(3). 270 (2000)

Kubota Ryo：“日本青光眼患者肌纤蛋白基因的诺贝尔突变”人类突变。

Takahashi Hiroki: "The myocilin (MYOC) gene expression in the human trabecular meshwork"Current Eye Research. 20(2). 81-84 (2000)

Takahashi Hiroki：“人类小梁网中的肌纤蛋白 (MYOC) 基因表达”当前眼科研究。