コンドロイチン硫酸生合成に関わるN-アセチルガラクトサミン転移酵素の研究

N-乙酰半乳糖胺转移酶参与硫酸软骨素生物合成的研究

• 批准号: 07857169
• 负责人: 北川 裕之
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Kobe Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07857169/
• 关键词: コンドロイチン硫酸; グリコサシノグリカン; 糖転移酵素; N-アセチルガラクトサミン; 生合成; 複合糖質; 酵素の精製

ウシ胎児血清を酵素源として本酵素の簡便なアッセイ法を開発し、このアッセイ法を用いてウシ胎児血清中の本酵素の性質を調べた。また、ウシ胎児血清中に本酵素と異なる新奇のα-GalNAc転移酵素を検出した。1.遠心カラム法を用いた簡易アッセイ法の開発とGalNAc転移酵素の反応条件の検討酵素源としてウシ胎児血清、ドナーはUDP-[^3H]GalNAc、アクセプターにはコンドロイチンを用いて酵素反応を行い、Sephadex G-25が詰まった注射筒に反応液をアプライし、その注射筒を試験管につり下げて遠心し溶出液を回収後、その放射活性を測定する簡易アッセイ方法を開発した。また、本酵素の至適pH、バッファー、金属要求性、そしてUDP-GalNAcやコンドロイチンに対するKm値を調べ、アッセイ系の確立を行った。現在、このアッセイ法を用いて、本酵素の精製を行っている。2.プロテオグリカンの糖-タンパク質結合領域に作用する新しいα-GalNAc転移酵素の発見コンドロイチン硫酸の重合に関与する上記のGalNAc転移酵素を研究している過程で、各種グリコサミノグリカンに共通である糖とタンパク質の結合領域四糖の化学合成品を糖受容体とし、ウシ胎児血清を酵素源として、コンドロイチン硫酸生合成の鍵となるGalNAc転移酵素について調べたところ、この酵素は従来から考えられていたβ-GalNAc転移酵素ではなく、α-GalNAc転移酵素である事を明らかにした。現在、このα-GalNAc転移酵素の精製のための簡易アッセイ法を開発中である。

ウ シ tire where を serum enzyme source と し て this simple enzyme の な ア ッ セ イ method を open 発 し, こ の ア ッ セ を イ method with い て ウ シ tire where serum の nature of this enzyme の を adjustable べ た. ま た, ウ シ tire where に this enzyme in serum と different な る novel の alpha GalNAc planning shift enzyme を 検 out し た. 1. The telecentric カ ラ を ム method with い た simple ア ッ セ イ method の open 発 と GalNAc の planning shift enzyme reverse 応 conditions の 検 for enzyme source と し て ウ シ fetal serum, where ド ナ ー は UDP - [^ 3 h] GalNAc, ア ク セ プ タ ー に は コ ン ド ロ イ チ ン を with い て enzyme reverse 応 を い, Sephadex G - 25 が wall ま っ た syringes に 応 solution を ア プ ラ イ し, そ の syringes を test tube に つ り under げ て telecentric し stripping liquid after を 収 back, そ の を radioactivity measurement す る simple ア ッ セ イ method を open 発 し た. ま た, this enzyme の to optimum pH, バ ッ フ ァ ー, metal requirements, そ し て UDP - GalNAc や コ ン ド ロ イ チ ン に す seaborne る Km numerical を べ, ア ッ セ イ line is の established を っ た. Now, the <s:1> アッセ アッセ method を uses アッセ て and this enzyme to <s:1> refine を to make って る る る る る. 2. プ ロ テ オ グ リ カ ン の sugar - タ ン パ ク qualitative combined with field に role す る new し い alpha GalNAc planning shift enzyme の 発 see コ ン ド ロ イ チ ン sulfate の overlap に masato and す る written の GalNAc planning shift enzyme を research し て い で る process, various グ リ コ サ ミ ノ グ リ カ ン に common で あ る sugar と タ ン パ ク four sugar の の combining fields Learn synthetics を sugar by let body と し, ウ シ tire where を serum enzyme source と し て, コ ン ド ロ イ チ ン sulfuric acid biosynthesis の key と な る GalNAc planning shift enzyme に つ い て adjustable べ た と こ ろ, こ の enzyme は 従 to か ら exam え ら れ て い た beta GalNAc planning shift enzyme で は な く, alpha GalNAc planning shift enzyme で あ る matter を Ming ら か に し た . Now, the <s:1> <s:1> α-GalNAc転 enzyme <s:1> refining <e:1> ため <s:1> simple アッセ method を is being developed である.

项目成果

北川裕之ら: "Microanalysis of glycosaminoglycan-derived disaccharides labeled with the fluorophore 2-aminoacridone by capillary electrophoresis and high -performance liquid chromatography." Analytical Biochemistry. 232. 114-121 (1995)

Hiroyuki Kitakawa 等人：“通过毛细管电泳和高效液相色谱法对荧光团 2-氨基吖啶酮标记的糖胺聚糖衍生的二糖进行微量分析。”232. 114-121 (1995)。

北川裕之ら: "N-Acetylgalactosamine (GalNAc) transfer to the common carbohydrate-protein linkage region of sulfated glycosaminoglycans: Identification of UDP-GalNAc: chondro-oligosaccharide α-N-acetylgalactosaminyltransferase in bovine serum." The Journal of Bi

Hiroyuki Kitakawa 等人：“N-乙酰半乳糖胺 (GalNAc) 转移到硫酸化糖胺聚糖的常见碳水化合物-蛋白质连接区域：UDP-GalNAc 的鉴定：牛血清中的软骨寡糖 α-N-乙酰半乳糖胺基转移酶。”

北川裕之ら: "Detection and characterization of UDP-GalNAc: chondroitin N-acetylgalactosaminyltransferase in bovine serum using a simple assay method." The Jouanl of Biochemistry. 117. 1083-1087 (1995)

Hiroyuki Kitakawa 等人：“使用简单的测定方法检测和表征 UDP-GalNAc：牛血清中的软骨素 N-乙酰半乳糖氨基转移酶。”《生物化学杂志》117。1083-1087 (1995)。

北川裕之ら: "Developmental changes in serum UDP-GlcA: chondroitin glucuronyltransferase activity." The Journal of Biological Chemistry. 271 (in press). (1996)

Hiroyuki Kitakawa 等人：“血清 UDP-GlcA 的发育变化：软骨素葡萄糖醛酸转移酶活性。”《生物化学杂志》271（出版中）。