生体内活性型ビタミンD量を調節する酵素遺伝子の構造と機能解析

体内调节活性维生素 D 量的酶基因的结构和功能分析

• 批准号: 07857167
• 负责人: 伊東 進
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07857167/
• 关键词: P450; 1α水酸化酵素; ビタミンD_3; 骨粗鬆症; フェレドキシン; フェレドキシン還元酵素; CYP24

(1)マウスフェレドキシン及びフェレドキシン還元酵素cDNAをSRαプロモーターの下流に連結したSRα‐FとSRα‐FRを作製した。次に、これら二つの発現ベクターを用いてCOS7細胞に遺伝子導入を行った。その結果、発現ベクターを遺伝子導入していないCOS7細胞に比べ、酵素活性の指標であるチトクロームC還元酵素活性を極めて高く有することが認められた。このチトクロームC還元酵素活性は、COS細胞より調製されたミトコンドリア画分の蛋白量やインキュベーション時間に比例して増加し、SRα‐Fを7.5μgとSRα‐FRを2.5μgを同時に遺伝子導入した場合に一番高い活性を得られることが認められた。さらに、チトクロームC還元酵素活性は、NADPHのみならずNADHを補酵素として利用できたが、その活性は、NADPHの方がより高く得られ、生体内におけるフェレドキシン還元酵素‐フェエドキシン電子伝達系と同様であると考えられた。(2)ビタミンD生合成・代謝酵素は、一般にNADPHからの電子をフェレドキシン還元酵素‐フェエドキシン電子伝達系を利用して受け取り、基質を酸化することが知られている。そこで、(1)で認められたCOS細胞内での高いチトクロームC還元酵素活性を利用し、この細胞にビタミンD代謝酵素の一つであるCYP24をさらに遺伝子導入することを試みた。SRα‐Fを7.5μgとSRα‐FRを2.5μgに加えCYP24発現ベクターであるSRα‐CYP24を5μg遺伝子導入を行ったところ、遺伝子導入していないCOS7細胞に比べ、約6倍の25‐hydroxyvitaminD_324位水酸化酵素活性が認められた。

(1) マ ウ ス フ ェ レ ド キ シ ン and び フ ェ レ ド キ シ ン also yuan enzyme cDNA を SR alpha プ ロ モ ー タ ー の obscene に link し た SR alpha と SR alpha ‐ ‐ F FR を cropping し た. に, こ れ ら two つ の 発 now ベ ク タ ー を with い て COS7 cell に heritage 伝 son import line を っ た. そ の results, 発 now ベ ク タ ー を posthumous son 伝 import し て い な い に COS7 cells than べ, enzyme activity の で あ る チ ト ク ロ ー ム C yuan を enzyme activity also extremely め て high く す る こ と が recognize め ら れ た. こ の チ ト ク ロ ー ム C also yuan は enzyme activity, COS cell よ り modulation さ れ た ミ ト コ ン ド リ ア draw points の protein quantity や イ ン キ ュ ベ ー シ ョ ン time に proportion し て raised し, SR alpha と SR alpha ‐ ‐ を 7.5 u F g FR を 2.5 mu g を に but at the same time 伝 son import し に た occasions a high い active を ら れ る こ と が recognize め ら れ た . さ ら に, チ ト ク ロ ー ム C also yuan は enzyme activity, NADPH の み な ら ず NADH を repair enzyme と し て using で き た が, そ の active は, NADPH の が よ り high く ら れ, born in vivo に お け る フ ェ レ ド キ シ ン also yuan enzyme ‐ フ ェ エ ド キ シ ン electronics 伝 da と with others で あ る と exam え ら れ た. (2) ビ タ ミ ン D は, general に biosynthesis, metabolism enzyme NADPH か ら の electronic を フ ェ レ ド キ シ ン also yuan enzyme ‐ フ ェ エ ド キ シ ン electronics 伝 da を using し て を け take り, matrix acidification す る こ と が know ら れ て い る. そ こ で, (1) で め ら れ た COS cell で の high い チ ト ク ロ ー ム C also yuan enzyme activity using を し, こ の cells に ビ タ ミ ン D metabolism enzyme の a つ で あ る CYP24 を さ ら に posthumous son 伝 import す る こ と を try み た. SR alpha と SR alpha ‐ ‐ を 7.5 u F g FR を 2.5 mu g に plus え CYP24 発 now ベ ク タ ー で あ る SR alpha ‐ CYP24 を 5 mu g heritage 伝 son import line を っ た と こ ろ, but 伝 import し て い な い に COS7 cells than べ, about six times の 25 ‐ hydroxyvitaminD_324 acidic enzyme to live Sex が recognize められた.

项目成果

Susumu Itoh: "Molecular cloning of 25-hydroxyvitamin D_3 24-hydroxylase(Cyp-24)from mouse kidney:its inducibility by vitaminD_3" Biochem.Biophys.Acta. 1264. 26-28 (1995)

Susumu Itoh：“来自小鼠肾脏的 25-羟基维生素 D_3 24-羟化酶 (Cyp-24) 的分子克隆：维生素 D_3 的诱导作用”Biochem.Biophys.Acta。

Hironori Nakura: "Evidence for lack of hepatic N-acetyltransferase in surcus(Surcus murinus)" Biochem.Pharmacol.50. 1165-1170 (1995)

Hironori Nakura：“surcus（Surcus murinus）中缺乏肝 N-乙酰转移酶的证据”Biochem.Pharmacol.50。

Susumu Itoh: "cDNA cloing of mouse ferredoxin reductose from kidney" Biochim.Biophys.Acta. 1264. 159-162 (1995)

Susumu Itoh：“来自肾脏的小鼠铁氧还蛋白还原糖的 cDNA 克隆”Biochim.Biophys.Acta。

Hisashi Hashimoto et al.: "Fetus-specific CYP3A7 and odut-specific CYP3A4 expressed in chinese hamster CHL cells have similar capacity to activate carcinogenic mycotoxins" Canser Res.55. 787-791 (1995)

Hisashi Hashimoto 等人：“中国仓鼠 CHL 细胞中表达的胎儿特异性 CYP3A7 和 odut 特异性 CYP3A4 具有相似的激活致癌霉菌毒素的能力”Canser Res.55。

Kan Chiba et al.: "N-oxygenation of 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine by the rat liver flavin-containing monooxygenase expressed in yeast cells" Eur.J.Pharmacol.293. 97-100 (1995)

Kan Chiba 等人：“酵母细胞中表达的大鼠肝脏含黄素单加氧酶对 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶进行 N-氧化”Eur.J.Pharmacol.293。