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Gene targeting法を利用した薬物代謝酵素欠損マウスの作出

利用基因打靶方法创建药物代谢酶缺陷小鼠

基本信息

批准号：
05857254
负责人：
伊東進
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05857254/
关键词：
チトクロームP450 CYP1A2 Gene targeting ES細胞薬物代謝酵素

项目摘要

申請者は、マウスゲノムライブラリーよりマウスCYP1A2遺伝子のクローニングを行い、CYP1A2遺伝子を単離した。この遺伝子の第2エクソン又は第4エクソン内にネオマイシン耐性遺伝子発現ベクターであるpMC1neoPoly(A)を挿入し、更にその下流にチミジンキナーゼ(HSV-TK)を接続したプラスミドCYP1A2(2)neoTK及びCYP1A2(4)neoTKを作製した。各々のプラスミドをES細胞の一つであるA3-1細胞にエレクトロポレーション法により遺伝子導入し、さらにG418とガンシクロビルによるネガティブ-ポジティブ法により耐性クローンを選択した。CYP1A2(2)neoTKを遺伝子導入した耐性細胞株は、得ることができなかったが、CYP1A2(4)neoTKを導入した耐性細胞株は、6クローン選択できた。これらのクローンが実際相同的組み換えを起こしているか否かを明らかにする目的で染色体DNAを単離した後、PCR法を行った。その結果、1個のクローンのみPCR法で相同的組み換えが起こっていることを確認した。さらに、ゲノムを用いたサザンブロット解析を行い、相同的組み換えのみが起こっているか否かを認識したところ、相同的組み換えのほかに、非相同的組み換えも起こっていることも認められ、特異的な相同的組み換えのみは起こっていなかった。したがって、胚盤胞への細胞の注入をすることができなかった。現在、他のES細胞(D3及びTT2)を用い、再度検討を行っている段階である。

The applicant, the applicant, the applicant and the CYP1A2 applicant. In the fourth chapter, you can see that you have a problem with pMC1neoPoly (A), that is, you have a problem with CYP1A2 (2) neoTK and CYP1A2 (4) neoTK, you can see that there is something wrong with you. In each case, there is an error in cell number A3-1, cell number A3-1. CYP1A2 (2) neoTK mutant was introduced into the tolerant cell line, CYP1A2 (4) neoTK was introduced into the tolerant cell line, and 6-cell line was selected. Do you want to know if you want to know that the DNA of the chromosome is isolated from the same tissue? the PCR method is effective. As a result, the same group, which uses the same PCR method, does not register the registration confirmation. In this case, you can use the same computer to analyze the data, the same component to start the message, the same component to know that, the same to know, the same to learn, and not the same to do so. The embryo cell is injected into the embryo cell and the embryo cell. At present, he uses the ES cell (D3 and TT2) and uses it again.