ガングリオシドを特異的に認識するタンパク質の探索

寻找特异性识别神经节苷脂的蛋白质

• 批准号: 07858073
• 负责人: 日向 昌司
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07858073/
• 关键词: ガングリオシド; ランダムペプチドライブラリー; ファージ

私は,ガングリオシドを特異的に認識するタンパク質を探索する戦略として,ガングリオシド結合性ペプチドの同定を目指している.本研究は,ランダムペプチドライブラリーを利用した特定ガングリオシド結合性ペプチドのスクリーニング法の可否を証明することを第一の目標とし,ガンの転移に深く関わっていることが示唆されているガングリオシドGD1aに焦点を絞り,GD1a結合性ペプチドの同定を行った.ガングリオシドGD1aをオクチルセファロースに吸着させ,GD1aアフィニティーカラムを作製した.このカラムにランダムペプチドライブラリー(様々な15アミノ酸配列をファージ上に発現させたもの)を添加し,結合したファージをGD1aで選択的に回収した.回収したファージを大腸菌へ感染させ増幅し,再度アフィニティーカラムで選択する操作を4回繰り返すことで,GD1aと結合するファージ群の濃縮に成功した.GD1a結合性ファージをクローン化して結合特異性を確認したところ,酸性リン脂質とは結合せず,GD3結合性及び非結合性のクローンが存在した.これらのファージからDNAを単離し,塩基配列を決定した結果,GD1a結合性ファージは,主に3種のファージクローンから由来していることが明かとなった.これらのファージが発現するペプチドは,疎水性アミノ酸残基と親水性アミノ酸残基(主に塩基性)が混在する特徴的な配列をしていた.現在,これらのペプチドを化学合成し,サイズ排除クロマトグラフィーによるガングリオシドとの結合解析を進めている.本研究によって,ランダムペプチドライブラリーがガングリオシド結合性ペプチドの探索において,極めて有効な手法であることが確認された.一方,本研究手法の限界を克服する新しい手法へと発展させる手掛かりも得られ,これを踏まえた予備実験において良好な結果が得られており,次年度の課題となった.

In private, you need to know that you have a special understanding of the situation, so that you can explore the situation slightly, and that you have the same goal. The purpose of this study is to determine whether it is possible to show that the first objective is to show that the focus of the GD1a is the same as that of the GD1a. I'm sorry, GD1a, I'm sorry, GD1a, I'm sorry, I'm sorry. This is the first time that you add the information that you want to add, and then combine it with the GD1a selected by the computer. In response to the outbreak of bacterial infection, please check again to select the operation for 4 cycles. The GD1a combination test was successful. The combination of GD1a and GD1a was used to make sure that it was successful. The combination of GD1a and acid fat was used to confirm the success of the operation. GD3 binding and non-combinative antigenicity exist. You need to determine the results of the DNA quarantine, the base configuration, the combination of GD1a, and the origin of the three major health care systems. in this way, you will understand the reasons for this. In this study, we found that the acid residues, acid residues and acid residues. Now, in the process of chemical synthesis, the chemical synthesis is very important, and the chemical synthesis is very important. The purpose of this study is to make sure that there is a problem in this study. in this study, there are many problems in this study. in this study, we are interested in the study. On the one hand, the method of this study is to overcome the limits of the new techniques, to overcome the new techniques, to show that the hands are successful, and to make sure that the results are good, and the next year's project will be successful.