増感ホタル発光反応を利用するアデノシン三リン酸の好感度計測法の開発

开发利用敏化萤火虫发光反应测量三磷酸腺苷灵敏度的方法

基本信息

  • 批准号:
    08650956
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.41万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    1996
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1996 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

ホタル生物発光の発光強度に及ぼすリポソームの影響を見るために、フォスファチジルコリン(PC)、コレステロール(Chol)およびステアリルアミン(SA)からなるリポソームを調整した。つぎに、リポソーム共存下でホタル発光反応を行った。その結果、脂肪族アミンであるSA(炭素数18)を含むリポソームを加えた場合のみ、発光強度が著しく増大した。そこで、発光強度に及ぼす脂肪族アミンの影響を検討するため、炭素数14および16のテトラデシルアミンおよびヘキサデシルアミンを用いてリポソームを調整し、発光強度への影響を検討した。その結果、脂肪族アミンの炭素数が増大するほど発光強度は増大し、また、SAの組成が30mol%のとき、発光強度が最も増大した。また、Cholについても検討した結果、リポソームを構成する物質に対し50mol%のとき、発光強度が最も増大した。つぎに、発光強度に及ぼすリポソームの表面電荷の影響を検討した。PC,CholおよびSAからなるリポソームの表面電荷は正、PCおよびCholからなるリポソームの表面電荷は両イオン性またPC,Cholおよびジセチルリン酸からなるリポソームの表面電荷は負となることから、それぞれの組成からなるリポソームを調整し、発光強度への影響を見た。その結果、表面電荷が正のリポソームが共存した場合、発光強度が最も増大した。つぎに、最適なホタル発光反応条件を確立するため、pH、ルシフェリン濃度、ルシフェラーゼ濃度およびリポソームの添加量について検討した。その最適反応条件において検量線を作成した。その結果、1.0pMから5.5nMの範囲において、アデノシン-3ーリン酸(ATP)の検量線は良好な直線となり、定量下限は1.0pNであった。定量下限はリポソームが共存しない場合と比較して、約8倍高感度になった。また、本法を大腸菌の菌体数の計測に応用した結果、340cells ml-1の大腸菌を測定できることが明らかになった。
The intensity of light and the intensity of light are different from each other. The intensity of light (PC), the intensity of light (Chol), the intensity of light, the intensity of light, the intensity of light In the case of the coexistence of light reflection and light reflection, there is a difference between the two groups. The results show that the aliphatic compound SA (carbon number 18) contains high carbon concentration, high light intensity, and high light intensity. The number of carbon is 14, 16, 16, 16, 14, 16, 16, 16, 14, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16, 16 The results showed that aliphatic carbon content, carbon content and SA concentration were 30 mol% and 30 mol%, respectively, and the light intensity was the highest. The results showed that the concentration of Chol was 50 mol%, and the light intensity was the largest. The temperature, the intensity of light and the temperature of the surface charge are sensitive to the temperature. The PC,Chol is sensitive to the surface charge, the PC is sensitive to the surface charge, the Chol is sensitive to the surface charge, the PC,Chol is sensitive to the surface charge, the temperature is sensitive to the surface charge, the temperature is different from the surface charge, the temperature is different from the surface charge, the temperature is different from the surface charge, the temperature is different from the surface charge, the temperature is different from the surface charge, and the temperature is different from the surface charge. The results show that the surface charge is positive, and the light intensity is the most sensitive. Make sure that the light reflection condition is correct, pH, temperature, temperature and temperature. This is the best way to reverse the condition, so as to make a difference. The results of the test, 1.0pM, 5.5nM range, ATP, 1.0pN, and the lower limit of quantification are good. The lower limit of quantification is about 8 times higher than that of coexisting drugs. The results of this method were used to calculate the number of bacteria, and 340cells ml-1 was used to determine the number of bacteria.

项目成果

期刊论文数量(3)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
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专利数量(0)
上館民夫: "Cationic Liposomes Enhanced Firefly Bioluminescent Assay of Adenosine 5'-Triphos phate Disodium Salt" Analytical Biochemistry. 244・1. 62-66 (1997)
Tamio Kamidate:“阳离子脂质体增强腺苷 5-三磷酸二钠盐的萤火虫生物发光测定”分析生物化学 244・1(1997)。
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上館民夫: "Assay of Phosphatidylcholine in Liposome Suspensions by Inductively Coupled Plasma Atomic Emission Spectrometry with Ultrasonic Nebulizer" Analytical Biochemistry. 241・2. 264-266 (1996)
Tamio Kamidate:“通过超声波雾化器感应耦合等离子体原子发射光谱法测定脂质体悬浮液中的磷脂酰胆碱”241・2(1996)。
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上館民夫: "DEAE-Dextran enhanced firefly bioluminescent assay of ATP" Chemistry Letters. 3. 237-238 (1996)
Tamio Kamidate:“DEAE-葡聚糖增强 ATP 萤火虫生物发光测定”《化学快报》3. 237-238 (1996)。
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