ウシ卵胞液由来新規軟骨形成因子の全塩基配列の解析とその大量発現系の検討

牛卵泡液新型软骨形成因子全核苷酸序列分析及其大规模表达系统研究

• 批准号: 08660359
• 负责人: 新井 克彦
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tokyo University of Agriculture and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08660359/
• 关键词: cartilage; chondrocyte; development; collagen

昨年までに、ウシ卵胞液粗精製画分を抗原として胎児軟骨細胞、筋芽細胞等の中胚葉系細胞に特異的に反応する単クローン抗体を作成し、さらに、この蛋白質をコードする遺伝子をウシ卵巣及びラット脳由来cDNAライブラリー(λgt11コンストラクト)よりクローニングすることに成功した。そのcDNAの塩基配列の解析をしたところ、トランスフォーミング成長因子β(TGFβ)スーパーファミリーや塩基性線維芽細胞成長因子(basic FGF)等、他の中胚葉誘導やそれに関連した形態形成に関わる因子とのホモロジーは低く、全く新しい物質であると考えられた。本因子の存在はラット脳においても確認されたため、ラット脳を用いて3'-RACEおよび5'-RACEを試みた。ラット脳よりpoly(A)^+RNA(mRNA)を調製し、既にクローニングされているcDNAの3'-末端及び5'-末端近傍から28塩基のプライマーを設計し、RACE(Rapid Amplificatiion of cDNA Ends)法を行なった。これにより、完全長のcDNAがクローニングされ、その全長は1.6kbpであった。メッセンジャーRNAの発現を検索したところ、RT-PCRによるとほとんどの実質組織でその発現が確認されたが、ノーザン・ブロットでは全く検出されず、非常に発現の低い遺伝子産物であることが示唆された。本年度はカイコ多核体病ウイルス由来プラスミドベクターによるその大量発現系の確立には至らなかったが、来年度のための予備的検討として、樹立細胞株であるC3H10T1/細胞等を理化学研究所細胞バンクより取り寄せ、II型コラーゲン等を軟骨分化の指標として細胞培養実験を行なっている。

Last year, the crude seminal fluid of oocytes and oocytes were divided into antigens, fetal bone cells, gluten bud cells and other mesoderm cells. The antibodies were made into antigens, antibodies, proteins, proteins, eggs, eggs and eggs. The cause of the disease is cDNA (λ gt11). On the basis of basic cDNA analysis, the growth factor β (TGF β), germ growth factor (basic FGF), cell growth factor, cell growth factor, cell growth factor, This factor requires that you confirm that you have a problem, and that you use 3'-RACE, 5'-RACE, and so on. The poly (A) ^ + RNA (mRNA) filter, the cDNA (3) end and the 5 (5) near the end of the device, the RACE (Rapid Amplificatiion of cDNA Ends) method and the RACE (Rapid Amplificatiion of cDNA Ends) method. Full-length cDNA operation, full-length 1.6kbp operation, and long-term performance. Do you want to know that you have a problem? you need to know that you have a problem. You have a problem. The cause of this year's disease is polynucleosis. This year, there are a large number of diseases, such as cell lines, C3H10T1/ cells, cell lines, and so on.

项目成果

Uehara,et al.: "Solubilization of hair recovered from a leather making process and properties of the degradation products" The 8th AAAP Animal Science Congress Proceedings. vol.2. 1042-1043 (1996)

上原等人：“从皮革制造过程中回收的毛发的溶解性和降解产物的特性”第八届 AAAP 动物科学大会论文集。

Sasaki,et al.: "Effects of a factor from polymorphonuclear leukocyte on the growth and collagen metabolism in normal and scleroderma skin fibroblast culture" J.Dermatol.Sci.11. 11-18 (1996)

Sasaki 等人：“多形核白细胞因子对正常和硬皮病皮肤成纤维细胞培养物的生长和胶原代谢的影响”J.Dermatol.Sci.11。

Kamiyama,et al.: "Calcium-dependent expression of keratohyalin granules in rat cultured keratinocytes" The 8th AAAP Animal Science Congress Proceedings. vol.2. 650-651 (1996)

Kamiyama 等人：“大鼠培养的角质细胞中角质透明蛋白颗粒的钙依赖性表达”第八届 AAAP 动物科学大会论文集。

MUZUTA,et al.: "Characterization of mono clonal antibodies recognizing human merosin and their use in affinity purification of native merosin" Hybridoma. 15. 373-378 (1996)

MUZUTA 等人：“识别人 Merosin 的单克隆抗体的表征及其在天然 Merosin 亲和纯化中的应用”杂交瘤。

NOMURA,et al.: "Separation of anti-shark type I collagen antibody from anti-pig type I collagen antiserum and its partial characterization" Biosci.Biotech.Biochem.60. 697-698 (1996)

NOMURA 等人：“抗鲨鱼 I 型胶原蛋白抗体与抗猪 I 型胶原蛋白抗血清的分离及其部分表征”Biosci.Biotech.Biochem.60。