遺伝子組換え法および糖鎖解析によるニワトリコクシジウムワクチンの作成

利用基因重组方法和糖链分析研制鸡球虫疫苗

• 批准号: 08660358
• 负责人: 中井 裕
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08660358/
• 关键词: コクシジウム; ニワトリ; ワクチン; モノクローナル抗体; 免疫アフィニティークロマトグラフィー

ニワトリコクシジウム症は養鶏産業に多大な被害を与える疾病である。コクシジウム原虫の組織への感染は原虫が宿主細胞を認識することによって開始するが、この認識機構を阻害することによって、感染防除が可能と考えられる。本研究は、原虫の宿主認識機構を担うリガンド分子のワクチンとしての可能性を調べるものである。本実験はin vitroでEimeria tenellaスポロゾイトの宿主細胞侵入を阻害し、E. tenellaの生活環の初期ステージに特異的に反応するモノクローナル抗体(KC-1抗体)を用いて行った。滅菌精製した胞子形成オーシストを超音波処理し、DE-52陰イオン交換クロマトグラフィーにて分画し、ELISA法により抗原活性の高い画分を得た。KC-1抗体をアフィゲルヒドラジンゲルにカップリングして調製した免疫アフィニティーカラムにこの画分を加えて吸着させ、PBSで洗浄後、5Mグアニジン塩酸(pH2.5)にて溶出を行って精製抗原分画を得た(KC-1抗原)。得られた抗原画分は分子量63kDa、25kDa、12kDaのペプチドを含み、25kDaのみがKC-1抗体に反応した。また、25kDa抗原の等電点は3.68であった。KC-1抗原をブロイラーヒナに対して2日齢時にフロイント完全アジュバントとともに9日齢時に不完全アジュバントとともに接種し、16日齢時に攻撃感染(300オーシスト/羽)を行ったところ、抗体価の急上昇が認められた。同様にブロイラーを用いて2日、9日、16日齢時に免疫し、23日齢時に攻撃感染(2,000オーシスト/羽)したところ、非免疫感染群と比べて病変の低減および増体量の改善が認められた。本抗原は今後、コクシジウムワクチン抗原候補の1つとなるものと考えられた。一方、オーシストの胞子形成過程におけるmRNAの発現を観察してmRNA分離の至適時期を決定し、得られたmRNAに対するcDNAを作成した。今後、遺伝子組換え法によるリコンビナント抗原の作成を試みる予定である。

How many victims and diseases do you have? The infection of protozoan tissues is related to the recognition of host cells, the recognition of mechanisms, the prevention of infection and the possibility of elimination. This study focuses on the possibility of host recognition. In fact, it prevents host cell invasion by Eimeria tenella pollen in vitro. The early stages of tenella's life cycle are characterized by specific antibodies (KC-1 antibodies). Sterilization, purification, spore formation, ultrasonic treatment, DE-52 anion exchange, and ELISA were used to determine the high level of antigen activity. KC-1 antibody was purified by adsorption, PBS washing, 5M hydrochloric acid (pH2.5) dissolution and purified antigen separation (KC-1 antigen) Antigen molecules with molecular weights of 63kDa, 25kDa and 12kDa were obtained, including KC-1 antibodies with molecular weights of 25kDa and 63 kDa. The isoelectric point of the 25kDa antigen was 3.68. The KC-1 antigen was found to have been infected by a virus on the 2nd day, completely lost on the 9th day, incompletely lost on the 16th day, and attacked by a virus on the 16th day (300 virus/feather). At the same time, the immune system was used on the 2nd, 9th and 16th day, and the attack infection (2,000 cases/feather) was used on the 23rd day. This antigen is a candidate for the antigen in the future. The mRNA expression in the process of cell formation was observed, and the optimal time for mRNA isolation was determined. In the future, the sub-group conversion method will be tested.