遺伝子組換えニワトリを用いたインフルエンザワクチン製造の効率化に向けた研究

Phic31依存的にSia-alpha2,6-Gal糖鎖の合成を行うニワトリST6-1遺伝子を発現する遺伝子組換えニワトリを作製にむけ、レトロウイルスベクターの感染により前年度に作製した遺伝子組換え初代キメラニワトリを交配することで、全身に組換え遺伝子を1コピーで有する遺伝子組換えニワトリの取得を試みた。しかし100羽以上のスクリーニングを行っても、目的の遺伝子組換えニワトリを取得することはできなかった。これは、レトロウイルスベクターによる生殖細胞への遺伝子導入効率が低いことが原因の一つであると考えられた。そこで生殖細胞に対して直接遺伝子導入を行うことで遺伝子組換えニワトリの取得効率増加を試みた。生殖細胞系列のもっとも上流に位置する幹細胞である始原生殖細胞 (PGC) をドナー胚より単離し、これに対して目的遺伝子を有するレンチウイルスベクターを感染させ、これをレシピエント胚に移植することで生殖系キメラニワトリを作製した。これまでにPhic31発現用レンチウイルスベクターは7回、計77胚の受精卵に対して、ST6-1発現用レンチウイルスベクターは5回、計61胚の受精卵に対して遺伝子導入を行った。これらにより作製した生殖系列細胞キメラニワトリについても現在交配・スクリーニングを行うことで目的の遺伝子組換えニワトリの取得を試みている。さらに、遺伝子組換えニワトリの取得向上を目指し、PGCのin vitro培養法の構築も同時に試みた。その結果、ニワトリ2.5日胚より採取した血液中のPGCを半年以上の長期間にわたり増殖および培養し続けることに成功した。これらのPGCは、生体内で生殖腺への定着能を持つことが胚への移植実験により確認された。現在、培養PGCへの効率的な遺伝子導入・改変手法の開発を行っており、本手法により効率的にこれらの遺伝子組換えニワトリが取得できるようになると考えている。

Phic31依存的にSia-alpha2,6-Gal糖鎖の合成を行うニワトリST6-1遺伝子を発現する遺伝子組換えニワトリを作製にむけ、レトロウイルスベクターの感染により前年度に作製した遺伝子組換え初代キメラニワトリを交配することで、全身に組換え遺伝子を1コピーで有する遺伝子組換えニワトリの取得を試みた。しかし100羽以上のスクリーニングを行っても、目的の遺伝子組換えニワトリを取得することはできなかった。これは、レトロウイルスベクターによる生殖細胞への遺伝子導入効率が低いことが原因の一つであると考えられた。そこで生殖細胞に対して直接遺伝子導入を行うことで遺伝子組換えニワトリの取得効率増加を試みた。生殖細胞系列のもっとも上流に位置する幹細胞である始原生殖細胞 (PGC) をドナー胚より単離し、これに対して目的遺伝子を有するレンチウイルスベクターを感染させ、これをレシピエント胚に移植することで生殖系キメラニワトリを作製した。これまでにPhic31発現用レンチウイルスベクターは7回、計77胚の受精卵に対して、ST6-1発現用レンチウイルスベクターは5回、計61胚の受精卵に対して遺伝子導入を行った。これらにより作製した生殖系列細胞キメラニワトリについても現在交配・スクリーニングを行うことで目的の遺伝子組換えニワトリの取得を試みている。さらに、遺伝子組換えニワトリの取得向上を目指し、PGCのin vitro培養法の構築も同時に試みた。その結果、ニワトリ2.5日胚より採取した血液中のPGCを半年以上の長期間にわたり増殖および培養し続けることに成功した。これらのPGCは、生体内で生殖腺への定着能を持つことが胚への移植実験により確認された。現在、培養PGCへの効率的な遺伝子導入・改変手法の開発を行っており、本手法により効率的にこれらの遺伝子組換えニワトリが取得できるようになると考えている。