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内向き整流Kチャネルのサブユニット構成とサブステートの分子機構

内向整流K通道亚基组成及分子机制

基本信息

批准号：
08670067
负责人：
松田博子
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kansai Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670067/
关键词：
Kチャネル内向き整流特性 COS-1細胞遺伝子導入 Mgイオン

项目摘要

心筋細胞の内向き整流Kチャネルでも、マウス大食細胞系からクローン化された内向き整流Kチャネル遺伝子(IRK1)によりCOS細胞に発現したチャネル(IRK1チャネル)でも、低濃度の細胞内Mgにより、外向き電流に、単位電流の1/3と2/3の大きさのサブレベルが出現する。サブステートの分子機構を解明する第一段階として、2個から8個までのIRK1遺伝子を直列に連結したホモマルティマ-をCOS細胞に導入したが、いずれの場合にも、一量体を導入した場合と同じ内向き整流Kチャネルが観察できた。この結果は、チャネル蛋白は、必ずしも同一のポリペプチドのすべてのサブユニットで構成されるのではなく、同じ、あるいは別のポリペプチドの一部のサブユニットで構成され得ることを示唆する。チャネルの孔部分を構成すると考えられているH5領域の部位特異性変異(E138Q)はチャネルのKコンダクタンスを消失させる。野生型とE138Qを直列に連結した二量体により発現したチャネルのコンダクタンスは、5から35pSの広い範囲に分布したが、これも前述の推論に一致する。しかしながら、同一のプリペプチドのサブユニットが集まってチャネルを構成する確率は高いと考えられるので、野性型IRK1の二、三、四量体とE138Q一量体を同時に導入し、コンダクタンスの違いが見られるかどうか検討した。いずれの場合も、野生型一量体の場合と同じコンダクタンスを示し、4つ以上のサブユニットで構成されていると考えられた。遺伝子導入されたCOS細胞で発現されているIRK1蛋白質を同定するため、IRK1のC末端領域に対するポリクローナル抗体を作製し、これを用いて、一量体およびホモマルティマ-を-導入したCOS細胞抽出液をイムノブロット法で解析すると、一量体では約57KDaで、導入する遺伝子の数が増えるにつれて、分子量がほぼその整数倍で増加することが確認できた。

Inward current generation in cardiac muscle cells occurs at low concentrations of intracellular Mg, outward current, 1/3 and 2/3 of unit current in large cell lines. The first stage of the molecular mechanism is explained in detail by the following: The results show that the protein content of the protein is the same as that of the protein content of the protein content of the protein A site-specific variation in the H5 domain (E138Q) occurs when the pore structure of the pore structure disappears. The wild type E138Q is linked to the two molecules, and the results are consistent with those described above. The accuracy rate of the composition of the group is high, and the wild IRK1 has two, three, and four components and E138Q has one component. In the case of wild-type, wild-type, wild-type IRK1 protein expression in COS cells after introduction of IRK1 protein was determined. IRK1 C-terminal domain was used to produce IRK1 antibody. A quantity of IRK1 protein was analyzed by PCR. A quantity of IRK1 protein was about 57KDa. Molecular weight increases by integer multiples.