cyclic ADP-ribose合成・分解酵素(CD38)の活性調節機構の解明

阐明环状ADP-核糖合成/降解酶（CD38）的活性调节机制

• 批准号: 08670132
• 负责人: 那谷 耕司
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670132/
• 关键词: CD38; cyclic ADP-ribose; ADP-ribose cyclase; cyclic ADP-ribose hydrolase; 細胞内情報伝達物質; カルシウムイオン; ATP; クローニング

研究代表者らが新しく見出した細胞内情報伝達物質cyclic ADP-ribose (cADPR)は、リンパ球の表面抗原であるCD38により合成・分解される。またCD38のcADPR分解活性はATPにより抑制される。本研究の目的は、cADPR合成・分解酵素(CD38)のATP結合部位を同定することである。平成8年度の研究計画は、計画どおりに進行し、以下の様に期待された成果が得られた。1.研究代表者らはすでにヒトインスリノーマ由来のRNAを鋳型にしたPCR法によりヒトCD38cDNAを単離している(J. Biol. Chem. 268, 26052-26054, 1993)ので、このcDNAを発現ベクターpMAL-c2に組込み、大腸菌に導入した。2. 1.で発現ベクターを導入した大腸菌を培養した後溶菌し、大腸菌内でマルトースバインディングプロテインとして発現しているCD38蛋白をアミロースレジンカラムを用いて精製した。3.精製CD38をATPの類似体である5'- (p-fluorosulfonylbenzoyl) adenosine (FSBA)とインキュベーションして標識した後エンドペプチダーゼで消化し、得られたペプチド断片をHPLC法により分離・精製した。4.FSBAに対する抗体を用いたウエスタン・ブロット法により、分解・精製したペプチド断片のなかからFSBAで標識されたペプチド断片を同定した。5. 4.で同定したペプチド断片のアミノ酸配列をペプチドシークエンサーを用いて決定したところ、CD38の129番目のLysがFSBA結合部位であることが明らかとなった。以上の結果から、CD38のATP結果部位は129番目のLysであることが明らかになった。

Out new research representatives ら が し く し た intelligence 伝 of substances in the cell cyclic ADP ribose - (cADPR) は, リ ン パ の ball surface antigen で あ る CD38 に よ り synthesis, decomposition さ れ る. Youdaoplaceholder0 CD38 <s:1> cADPR decomposition activity また ATPによ によ される inhibition される. The objective of this study is to を determine the ATP binding site of cADPR synthesizing and decomposing enzyme (CD38) を する とである とである とである. In the Heisei 8 fiscal year, the <s:1> research plan and the plan <s:1> お に に are being carried out に, and the following に are expected to achieve された results が and られた. 1. The representatives ら は す で に ヒ ト イ ン ス リ ノ ー マ origin の RNA を type where に し た PCR method に よ り ヒ ト CD38cDNA を 単 from し て い る (j. Biol. Chem. 268, 26052-26054, In 1993, <s:1> で and <s:1> cDNAを were introduced into ベ タ and <s:1> pMAL-c2に groups 込み and escherichia coli に were introduced into た. 2. 1. で 発 now ベ ク タ ー を import し た coliform を cultivate し た lysis after し, coliform で マ ル ト ー ス バ イ ン デ ィ ン グ プ ロ テ イ ン と し て 発 now し て い る CD38 protein を ア ミ ロ ー ス レ ジ ン カ ラ ム を with い て refined し た. 3. Refined CD38をATP <s:1> analogue である5'- (p-fluorosulfonylbenzoyl) adenosine (FSBA) と イ ン キ ュ ベ ー シ ョ ン し て logo し た after エ ン ド ペ プ チ ダ ー ゼ で digestion し, ら れ た ペ プ チ ド fragment を HPLC に よ り separated, refined し た. 4. FSBA に す seaborne を る antibody with い た ウ エ ス タ ン · ブ ロ ッ ト method に よ り, decomposition, refined し た ペ プ チ ド fragment の な か か ら FSBA で logo さ れ た ペ プ チ ド を fragment with fixed し た. 5. 4. で with fixed し た ペ プ チ ド fragment の ア ミ ノ acid with column を ペ プ チ ド シ ー ク エ ン サ ー を with い て decided し た と こ ろ, CD38 の 129's mesh の Lys が FSBA combining site で あ る こ と が Ming ら か と な っ た. The above <s:1> results ら ら, CD38 <s:1> ATP result site ら 129 series <s:1> Lysである とが とが Ming ら になった になった になった.

项目成果

池端史子: "糖尿病患者におけるCD38 (cyclic ADP-ribose合成・分解酵素)自己抗体の存在" 糖尿病. 39. 183-183 (1996)

Fumiko Ikebata：“糖尿病患者中 CD38（环状 ADP-核糖合成/降解酶）自身抗体的存在”糖尿病。 39. 183-183 (1996)

Naoya Noguchi: "Cyclic ADP-ribose binds to FK506-binding protein 12.6 to release Ca^2 from islet microsomes." Journal of Biological Chemistry. 272. 3133-3136 (1997)

Naoya Noguchi：“环状 ADP-核糖与 FK506 结合蛋白 12.6 结合，从胰岛微粒体中释放 Ca^2。”

東郷暁: "インスリン分泌のセカンドメッセンジャーcyclic ADP-riboseの合成・分解酵素(CD38)のATPによる調節の分子機構" 分子糖尿病学. 7 (in press). (1997)

Akira Togo：“ATP 介导的环状 ADP-核糖合成/降解酶（CD38）调节的分子机制，胰岛素分泌的第二信使”《分子糖尿病学》7（出版中）。

Koji Nata: "Human gene encoding (ADP-ribosyl cyaclase/cylcic ADP-ribose hydrolase) : organization, nucleotide sequences and alternative splicing." Gene. (in press). (1997)

Koji Nata：“人类基因编码（ADP-核糖基环化酶/环状 ADP-核糖水解酶）：组织、核苷酸序列和选择性剪接。”

Akira Tohgo: "Lysine 129 of CD38 (ADP-ribosyl cyaclase/cylcic ADP-ribose hydrolase) Participates in the Binding of ATP to inhibi the Cyclic ADP-ribose Hydrolase." Journal of Biological Chemistry. 272. 3879-3882 (1997)

Akira Tohgo：“CD38（ADP-核糖基环化酶/环状 ADP-核糖水解酶）的赖氨酸 129 参与 ATP 的结合，从而抑制环状 ADP-核糖水解酶。”