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インフルエンザウイルスゲノムRNA分節のパッケージングにおけるNS2蛋白の役割

NS2蛋白在流感病毒基因组RNA片段包装中的作用

基本信息

批准号：
08670350
负责人：
小田切孝人
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Jichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

インフルエンザウイルス干渉性欠損粒子(DI粒子)に含まれているDIRNAは、8種類の遺伝子RNA分節の中からそれが由来したポリメラーゼ遺伝子(親遺伝子)のみを選択して、そのパッケージングを特異性に抑制する。本研究では,DI RNAの標的となるRNA分節の選択制を規定している識別シグナルの同定を行い以下の成績を得た。1.PAおよびPB2遺伝子RNAのコード領域をCATレポーター遺伝子のコード領域で置換した組み換え体CATRNA(PA/CATRNAおよびPB2/CATRNA)をプラズミドから合成し、これらを導入した細胞からPADIRNAを持つNS2変異株およびDIRNAを持たない野生株でレスキューした。野生株は導入した全てのCATRNAをウイルス粒子中にレスキューしたが、NS2変異株においては、PB2/CAT RNAはレスキューされたが,PA/CAT RNAはレスキューされなかった。この結果は、変異株が持つPA DIRNAはPB2/CATRNAと競合せずにPA/CATRNAのみと競合して、そのパッケージングを阻害したことを示している。2.PA遺伝子の片方の非コード領域をPB2遺伝子の非コード領域で置き換えたCAT RNAは、頻度は低いものの変異株でレスキューされた。さらに、PA遺伝子に特有な領域の両末端7〜8塩基を同時にPB2の塩基配列で置換したキメラCAT RNAは、PB2/CAT RNAと同様の頻度でレスキューされた。以上の成績から、DIRNAがパッケージング抑制の標的とするRNA分子を選択するためのシグナルは、各RNA分節の非コード領域に存在し、その中でもそれぞれの分節に特有な両末端7〜8塩基は、識別にとって必須な領域であることが明らかになった。現在、このRNA分子識別に関与するNS2蛋白の機能解析を進めている。

In the case of DI particles, 8 kinds of RNA fragments are selected from among the 8 kinds of DNA fragments, and the DNA fragments are specifically inhibited. In this study, the following results were obtained from the identification and identification of DI RNA target RNA segmentation system. 1. PA and PB2 gene RNA are introduced into cells from PADI RNA to NS2 mutants and DIRNA from wild plants. The wild plants were introduced into the whole CAT RNA, and the NS2 plants were introduced into the whole CAT RNA. The results showed that PA DIRNA was resistant to PB2/CATRNA and was resistant to PA/CATRNA. 2. The non-female domain of PA gene is replaced by the female domain of PB gene. The frequency of CAT RNA is low. In addition, the 7 ~ 8 bases of the PA gene specific domain are simultaneously aligned with the PB2 gene base, and the CAT RNA and PB2/CAT RNA are aligned with each other. The above results show that DIRNA is a target for RNA molecule selection and identification, and there are 7 ~ 8 bases in each RNA segment that are unique to the segment. Now, RNA molecular recognition is related to the functional analysis of NS2 protein.