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日本脳炎ウイルス増殖におけるプロセシングとウイルス粒子形成調節機構の解析

乙型脑炎病毒增殖过程中病毒颗粒形成的加工及调控机制分析

基本信息

批准号：
04271211
负责人：
保井孝太郎
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Institute for Neuroscience
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04271211/
关键词：
日本脳炎ウイルスプロセシング機構エンブロープ粒子 E蛋白 C蛋白 M蛋白 NS3

项目摘要

日本脳炎ウイルス遺伝子のcDNAを用いて、構造蛋白を発現する組換えワクチニアウイルスおよびバキュロウイルスを作成した。また同じくSRaプロモーターを用いた構造蛋白発現体を構築した。これらの発現体を用いて日本脳炎ウイルス増殖の後期過程における、ウイルス粒子形成と構造蛋白のプロセシング機構との関連について解析した。構造蛋白C、M、Eのプロセシングは、細胞の酵素とウイルス由来の酵素が関与しており、C蛋白とpreM蛋白の間、M蛋白とE蛋白との間、E蛋白とNSI蛋白の間は、小胞体に存在するシグナラーゼが切断することが明らかになった。preM蛋白は、ゴルジ体に存在する酵素によってpreとMに切断され、M蛋白部分がエンベロープに残る。このような構造蛋白のプロセシングは、ウイルス感染において最も重要な役割をはたす蛋白であるEの構造構築に必須であることが明らかになった。一方preM-E遺伝子を持った発現体は、細胞外にM-Eエンベロープ粒子を発現放出するが、C-preM-E遺伝子を持った発現体は、M-Eエンベロープ粒子の形成が抑成された。C-preM-E発現体にns2b-NS3発現体を加えると、M-Eエンベロープ粒子が形成され細胞外に放出された。このNS3の効果を解析したところ、C蛋白がNS3とシグナラーゼによる2段階のプロセシングヲ受けることが明らかになった。C蛋白はC末端部位に存在するシグナルペプチドで小胞体膜に結合しているが、NS3によるプロセシングを受けることによりこのシグナルペプチドが除かれる。このNS3によるプロセシングを受けていないC蛋白は、エンペロープ粒子の形成を阻害することが分かった。またNS3はヘリカーゼ活性ドメインを持っており、replicative form RNAと結合する。この結果から、replication complex内においておこるウイルス粒子形成は、NS3蛋白によって調節されていることが示唆された。

The cDNA sequence of the Japanese virus is used to construct protein expression. The structure of the protein was constructed by the same method. The development of these proteins is related to the late stages of their proliferation, their particle formation, and their structural mechanisms. Protein C, protein M, protein E, protein C, protein M, protein E, protein C, protein E, protein Pre-M protein is a protein that contains enzymes that can be cut off from the pre-M protein. The most important part of the structure of the protein is its infection. A pre-M-E gene is produced in the presence or absence of extracellular M-E gene particles, and a C-preM-E gene is produced in the presence or absence of M-E gene particles. C-preM-E gene expression nS2b-NS3 gene expression nS2b-NS2b-NS3 gene expression nS2b-NS2b-NS3 gene expression nS2b-NS3 gene expression nS2b-NS2b-NS3 gene expression nS2b-Ns3 gene expression nS2b-Ns2b-Ns3 gene expression nS2b-Ns2b-Ns2b-Ns3 gene expression nS2b-Ns2b-Ns The analysis of NS3 and C protein results show that NS3 and C protein have different levels. Protein C is present in the C-terminal region and binds to the membrane of small cells in the NS3 region. The NS3 protein is the inhibitor of particle formation. NS3 is a highly reactive RNA molecule that binds to replicative form RNA. As a result, NS3 protein regulates particle formation in the replication complex.