慢性関節リウマチ患者の関節滑膜からEBV遺伝子発現の滑膜細胞株の樹立とその解析

类风湿关节炎患者关节滑膜表达EBV基因滑膜细胞系的建立及分析

• 批准号: 08670530
• 负责人: 小出 純
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Saitama Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670530/
• 关键词: 慢性関節リウマチ; EBウィルス; 滑膜細胞株; モノクローナル抗体; 線維芽細胞; 細胞増殖反応; bFGF; EBウイルス; インターロイキン(IL)10; 塩基性線維芽細胞増殖因子(bFGF); TGFβ1; LMP-1; EBNA陽性

前年度、慢性関節リウマチ(RA)患者から採取した滑膜組織より、EBウィルス感染繊維芽細胞(fb)株(DSEK)を樹立したことを報告した。今年度は、DSEK細胞株の細胞表面抗原に対するモノクローナル抗体(Mo.Ab)を作成し、その特徴を検討した。方法は、まず、DSEK細胞株をBalb/cマウスに免疫したのち、その脾細胞を取り出し、それとNS-1マウス骨髄腫細胞を細胞隔合させてハイブリドーマを作成した。その後、増殖してきたwellの培養上清中の、DSEK細胞の細胞表面分子に対する抗体価をFACSによってスクリーニングした。そして、抗体価の高い有意なwellのbulkを1wellあたり0、7個の限界希釈法によりクローニングを施工した。その後、抗体価が高く、増殖力の強いクローンを選択し、それをプリスタン処理Balb/cマウスの腹腔に注入し、腹水を産生させた。その腹水から、Mo.AbをプロテインAカラムを用いて部分精製を行った。さらに、ウェスタン・ブロッティングを施工して、かかるMo。Abの抗原分析を検討した。また、かかるMo。Abが、DSEK細胞の細胞増殖反応とサイトカイン産生にどのような影響を及ぼすかをキットを用いて測定した。結果は、我々が作成した、DSEK細胞と強く反応するMo.Abのうち、No.5抗体はリンパ球や顆粒球とは反応せず、増殖後のRA滑膜fbや、皮膚fb株、肺fb株、血管内皮細胞株などと有意に強く反応した。そのNo.5抗体は、分子量約130Kd(還元型)で、DESK細胞の細胞増殖反応やbFGF(basicfibroblast growth factor)産生を有意に抑制することができた。以上より、fb系を特異的に認識し、増殖抑制機能を有する、未知のMo.Abを樹立した可能性があり、臨床的に有用であると考えられる。

Before the year section, chronic masato リ ウ マ チ (RA) patients か ら take し た synovial tissue よ り, EB ウ ィ ル ス infection 繊 d bud cells (fb) strains (DSEK) を set し た こ と を report し た. Our は, DSEK cell lines の cell surface antigen に す seaborne る モ ノ ク ロ ー ナ ル antibodies (Mo) Ab) を し, consummate そ の, 徴 を beg し 検 た. Methods は, ま ず, DSEK cell lines を Balb/c マ ウ ス に immune し た の ち, そ を の spleen cells take り し, そ れ と NS - 1 マ ウ ス を bone marrow and swollen cells separated us さ せ て ハ イ ブ リ ド ー マ を made し た. そ の, raised after colonization し て き た well の の, DSEK cells in culture supernatant の cell surface molecule に す seaborne る antibody 価 を both FACS に よ っ て ス ク リ ー ニ ン グ し た. High そ し て, antibody 価 の い intentionally な well の bulk を 1 well あ た り 0, 7 の limit when 釈 method に よ り ク ロ ー ニ ン グ を construction し た. そ の, antibodies after 価 が く, raised high yield strength strong の い ク ロ ー ン を sentaku し, そ れ を プ リ ス タ ン 処 Richard マ Balb/c ウ ス の に injected into abdominal cavity し, ascites を さ せ た. Youdaoplaceholder0 そ ascites ら, Mo.Abをプロテ をプロテ カラムを Aカラムを is refined with a part of the を て and った. Youdaoplaceholder0, ウェスタ ブロッティ · ブロッティ グを グを construction る て, る るMo. Ab ₂ antigen analysis を検 to claim た. Youdaoplaceholder0, また るMo. Ab が, の DSEK cells raised colonization 応 と サ イ ト カ イ ン produce に ど の よ う な influence を and ぼ す か を キ ッ ト を with い て determination し た. Results は, I 々 が made し た, DSEK cell と く reverse 応 す る Mo. Ab の う ち, No. 5 antibody は リ ン パ ball や particles と は anti 応 せ ず, raised after colonization の RA synovial fb や, skin fb seedlings, vascular endothelial cell lines, lung fb な ど と intentionally に く reverse 応 し た. Youdaoplaceholder0 <s:1> No.5 antibody そ, with a molecular weight of approximately 130Kd(reduced type)で, DESK cell <s:1> cell proliferation anti-応 やbFGF(basicfibroblast growth factor) production を intentionally に inhibits する する とがで た た た た. Above よ り, fb を specific に know has し, raised colonization suppression function を す る, unknown の Mo. Ab を set し た possibility が あ り, clinical に useful で あ る と exam え ら れ る.

项目成果

Jun Koide: "Spontaneous establishment of an Epstein-Barr Virus-infected fibroblast line from the synovial tissue of a Rheumatoid Arthritis patient." Journal of Virology. 71・3. 2478-2481 (1997)

Jun Koide：“从类风湿性关节炎患者的滑膜组织中自发建立感染 Epstein-Barr 病毒的成纤维细胞系。”病毒学杂志 71・3 (1997)。

小出 純: "EBウィルスと慢性関節リウマチ" Molecular Medicine. 34・11. 1348-1354 (1997)

小出淳：《EB病毒与类风湿性关节炎》《分子医学》34・11（1997）。