先天性角化異常症モデルによる表皮遺伝子治療の研究

先天性角化不良模型的表皮基因治疗研究

• 批准号: 08670980
• 负责人: 山西 清文
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670980/
• 关键词: トランスグルタミナーゼ1; 葉状魚鱗癬; モデルマウス; ジーンターゲティング; 遺伝子治療

先天性角化異常症である常染色体劣性葉状魚鱗癬のモデルとして、その原因遺伝子のひとつであるトランスグルタミナーゼ1(TGase1)遺伝子のノックアウトマウスを作製した。相同染色体組み換えを利用して、ES細胞においてTGase1遺伝子にヘテロの変異をもつESクローン得るために、まず、ヒトTGase1 cDNA (2.6kb)の配列をもとにプライマーを作製し、CD-1マウス表皮RNAを鋳型としてRT-PCRを行った。得られたマウスTGase1 cDNAを用いて、129/SvJゲノムライブラリーをスクリーニングし、129/SvJマウスのTGase1ゲノムDNAを単離し、そのプロモーター領域とエクソン1を含むゲノムDNAの両側の領域をターゲティングベクターpPNTに組み換えた。得られたターゲティングベクターをESに導入し、20の変異ESクローンを得た。そのなかで、核型に異常のないESクローンを、マイクロインジェクションによりC57BL/6の胚盤胞に導入し、キメラマウスを作製した。キメラマウスをC57BL/6と交配して、F1ヘテロ変異マウスを得、ヘテロの交配によってホモ変異マウスを作製した。TGase1の遺伝子構造をPCR、サザン法によって確認した結果、得られた新生仔マウスは、TGase1遺伝子を欠損したノックアウトマウスであることが証明された。現在、TGase1ノックアウトマウスの表現型を解析するとともに、正常遺伝子導入を行っている。

Congenital Keratosis: Autosomal Inferior Ichthyosis Phylloides, Causes of the Disease, Causes of the Disease, and Causes of the Disease TGase1 cDNA (2.6kb) was cloned into ES cells and sequenced using the same genomic DNA sequence. CD1 cDNA was cloned into ES cells and sequenced using RT-PCR. TGase1 cDNA was obtained from the 129/SvJ cDNA library. The 129/SvJ cDNA library was used for DNA isolation, domain analysis and PNT group analysis. Get the right answer. Get the right answer. Get the right answer. C57BL/6 blastoderm cells were introduced and controlled. C57BL/6 mating, F1 mating TGase1 gene structure PCR, Now, TGase1 can be used to analyze the phenotype of the virus and to introduce normal genes.

项目成果

Eiichiro Ueda, et. al.: "The η isoform of protein kinase C mediates transcriprional achintion of the human transglutaminase 1 gere" J. Biol. Chem.271 (16). 9790-9794 (1996)

Eiichiro Ueda 等人：“蛋白激酶 C 的 eta 亚型介导人转谷氨酰胺酶 1 的转录作用”J. Biol.271 (16) 9790-9794。

Kiyofumi Yamanishi: "Gcne analysis of human skin and skin diseases" J. Dermatol. Sci.11 (3). 169-176 (1996)

Kiyofumi Yamanishi：“人类皮肤和皮肤病的 Gcne 分析”J. Dermatol。

土井浩他: "転写因子Sp1によるヒトtransglutaminase1遺伝子の転写制御" 医学のあゆみ. 177 (3). 281-282 (1996)

Hiroshi Doi 等人：“转录因子 Sp1 对人类转谷氨酰胺酶 1 基因的转录调节”，《医学史》177 (3) 281-282 (1996)。

山西清文: "表皮のDNAバイオロジー" 日本皮膚科学会雑誌. 106 (13). 1602-1607 (1996)

Kiyofumi Yamanishi：“表皮 DNA 生物学”，日本皮肤病学会杂志 106 (13) (1996)。