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レンチウイルスベクターによる子宮内表皮遺伝子治療

使用慢病毒载体进行宫内表皮基因治疗

基本信息

批准号：
13877132
负责人：
山西清文
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyoto Prefectural University of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

表皮における遺伝子機能の補充、変異遺伝子の矯正など、遺伝子レベルの治療については、遺伝子の送達効率、導入した遺伝子の安定性、ベクターの免疫原性、発現効率の問題などにより、未だに理想的な表皮遺伝子治療用ベクター系は得られていない。しかし、vesicular stomatitis virusのエンベロープをウイルス表面にもつ組換えpseudotypeレンチウイルスベクターを用いれば、遺伝子が非分裂細胞のゲノムに組み込まれ、遺伝子導入後持続的に長期の遺伝子発現(6ヶ月以上)が期待できる。そこで、まず、HIV-1のプロウイルスゲノムをパッケージング、エンベロープ、ベクターの3つに分けてプラスミドを構築した。パッケージングプラスミドは、gag、pol、env以外に、修飾遺伝子であるvif、vpr、vpu、nefと制御遺伝子tat、revをもつようにデザインし、エンベロープにはVSV-G遺伝子を組換えて角化細胞にも感染可能にした。ベクターは、LTR、パッケージングシグナル、逆転写プライマー結合部位、マーカーとしてGFP遺伝子をもつように構築し、転写されたGFP mRNAはウイルス粒子内に取り込まれ、感染後、逆転写されて、角化細胞の染色体に組み込まれるようにデザインした。これらのプラスミドを293T細胞に導入し、感染細胞にGFPを発現するpseudotypeレンチウイルスベクターを得、妊娠15日マウスの羊水中に投与した。その結果、アデノウイルスと異なり、母体への影響はなく、18。5日目の胎児上皮におけるGFPの発現が確認された。しかし、分化した角化細胞には感染可能であるが、早期に脱落することから、今後、表皮幹細胞へ感染させる方策について検討が必要と思われた。

Complement of epidermal gene function, correction of variant gene, treatment of gene, delivery efficiency of gene, stability of introduced gene, immunogenicity of gene, problem of development efficiency, problem of ideal epidermal gene treatment system. There are many things to do, such as the use of pseudotypeン, the formation of genetic proteins as essential components of non-dividing cells, and the long-term emergence of genetic proteins (more than 6 months) that will persist after the introduction of genetic proteins. The HIV-1 virus has been identified as a virus, a virus, a virus. In addition to VSV-G, VSV-G, V-G, VSV-G, V-G, VSV-G In addition, GFP gene expression was constructed, GFP mRNA was written, and the chromosome organization of keratinocytes was analyzed. In this case, the introduction of 293T cells, the expression of GFP in infected cells, and the injection of GFP into amniotic fluid on the 15th day of pregnancy The results of the test, the differences between the test and the parent test, 18. GFP expression in fetal epithelium was confirmed on the 5th. For epidermal stem cells, there is a need to consider the possibility of infection, early shedding, and future infection strategies.