エンドセリン-1ノックアウトマウスを用いたエンドセリンの腎作用の解析

使用内皮素-1 敲除小鼠分析内皮素的肾脏影响

• 批准号: 08671301
• 负责人: 内田 俊也
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Teikyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08671301/
• 关键词: Endothelin; TGF-β; mRNA; 尿細管由来培養細胞; エンドセリン; メサンギウム細胞; 急性腎不全; メッセンジャーRNA; 虚血再潅流; ノックアウトマウス; スーパーオキシドディスムターゼ

エンドセリンの腎尿細管作用は、Na再吸収の抑制などが提唱されているが不明な点が多い。機能に及ぼす影響よりは、種々のサイトカインを分泌させ尿細管間質障害あるいは線維化に関与する可能性が指摘されてきた。われわれはこれまで腎尿細管由来のMDCK細胞、LLC-PK1細胞を用い、エンドセリン-1のmRNA発現、それに影響を及ぼすTGF-βの効果について調べた。すると、TGF-βは用量依存性にエンドセリン-1のmRNA発現を増加させ、これはプロテインキナーゼCを介することが判明した。一方のTGF-βもMDCK細胞において遺伝子発現があるが、これはTGF-βによって自己誘導されていることがわかった。すなわち、エンドセリン-1もTGF-βも一旦誘導されればpositive feedbackされることになる。次にin vivoの実験として急性腎不全モデルを作製した。臨床的にエンドセリンの関与が注目されている急性腎不全のモデルとして、虚血-再潅流モデルを用い、スーパーオキシドディスムターゼ(SOD)・エンドセリン発現の関連において検討した。そのためまずラットの虚血-再潅流モデルを用いて基礎的検討を行った。腎糸球体・尿細管の内因性SODは虚血-再潅流2時間後に著しく減少していることが共焦点レーザー顕微鏡にて観察された。そこで外因的にSODを投与してみることにした。しかしながらSODの血中半減期は極めて短く、大量注射しないと効果は期待しづらい。そこでSODをレシチン化することによって細胞への吸着性を高め効果が少ない量でかつ持続するように工夫した。24時間後の血清はCrは前値の3倍に上昇し、Shamラットでは変化なかった。このモデルを用い、レシチン化SODを静注した場合、血清Crの上昇は用量依存性に抑制された。レシチン化しないSODを使用した場合に比較し、1桁以上効果が増大した。さらにレシチン化SODを静注するタイミングを検討したところ、虚血1時間前、虚血直前、再潅流直前、再潅流1時間後の4点では有意な差はなく、再潅流後に静注しても効果が見られたことはきわめて興味深い。しかしながら、ラットでみられるような虚血-再潅流モデルは安定したものが作成されないため、それ以上の追求は不可能であった。

The role of the kidney and urinary tubules, the inhibition of Na reabsorption, and the suppression of Na reabsorption are all unknown. The function and the influence of the function, the type of secretion, the urinary tubule interstitial disorder, the line dimensionality and the possibility of the disease are all pointed out. MDCK cells, LLC-PK1 cells from which kidney and urine tubules are derived, and Eno The expression of ドセリン-1 and the effect of それに and the effect of ぼすTGF-β are adjusted. The dosage dependence of TGF-β and TGF-β on the expression of にエンドセリン-1のmRNAを Increase the addition of させ, これはプロテインキナーゼC を Introduction することが clarification した. One of the TGF-β MDCK cells is the original TGF-β gene, and the TGF-β gene is induced by itself.すなわち、エンドセリン-1もTGF-βもOnce induced されればpositive feedbackされることになる. Time is in vivoの実験としてacute renal insufficiencyモデルをproducedした. The clinical relationship between acute renal insufficiency, blood deficiency and blood deficiency-recurrent bleeding Use い、スーパーオキシドディスムターゼ(SOD)・エンドセリン発成のrelated において検検した.そのためまずラットの性blood-Re-flow モデルをUse いてbasic 検 to discuss を行った. Intrinsic SOD of renal glomerulus and urinary tubules is due to blood deficiency - the blood loss after 2 hours of re-flow is reduced and the confocal microscopic examination is carried out. The そこででにSODをinvested in the してみることにした.しかしながらSODのThe half-reduction period in the blood is very short, and the effect of large-scale injection is しづらい.そこでSOD をレシチン化することによって Cell への High sorption effect が な い amount で か つ 続 す る よ う に し た. After 24 hours, the blood serum will rise 3 times as much as before, and the serum will increase 3 times. When このモデルを is used, レシチン化 SOD is used for intravenous injection, and the increase in serum Cr is dose-dependent and can be suppressed. When using the レシチン化しないSODをcomparison, the effect of 1 beam or more will be greatly increased.さらにレシチン化 SODをIntravenous injection of するタイミングを検したところ, deficiency of blood 1 time ago, deficiency of blood straight before, relapse of blood straight before, After 1 hour of re-flowing, the 4 o'clock is interesting and the effect is good.しかしながら、ラットでみられるようなblood deficiency-re-flow モデルは stabilizeしたものが成されないため、それ上の pursuing はimpossibleであった.

项目成果

Michitaka Fujimaki et al.: "Long-term Effect of Manidipine on Renal Function and Structure in Uniephrectomized Spontaneous Hypertensive Rats" Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology.

Michitaka Fujimaki 等人：“马尼地平对单肾切除自发性高血压大鼠肾功能和结构的长期影响”临床和实验药理学和生理学。