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内在性・外在性細胞質プロテアーゼ・インヒビターを用いた肝虚血・再潅流傷害の制御

使用内源性和外源性细胞质蛋白酶抑制剂控制肝缺血和再灌注损伤

基本信息

批准号：
08671440
负责人：
梅下浩司
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ラット初代培養肝細胞にtert-butyl hydroperoxide(TBHP)を負荷するoxidative stressの系で、カルシウム依存性蛋白分解酵素カルパインの阻害剤カルペプチンが有効であるという知見を得たが、他の阻害剤と同様にカルペプチンは細胞膜透過性が少なく生細胞内でカルパインを十分制御することは困難であることが判明した。そこで、カルパインのアンチセンスを細胞内に導入することでカルパインの制御を試みた。細胞はhuman hepatoblastomaのcell lineあるHuH7を使用した。アンチセンス導入にはHVJ-liposomeを用いた。HVJ-liposomeのHuH7へのアンチセンス導入効率をFITCで標識したアンチセンスを導入しレザー共焦点顕微鏡で検討したところ100%であった。また、カルパインの発現を蛋白レベルで検討した結果、有効なアンチセンスを見出せた。アンチセンス導入によりカルパインの発現を抑えたHuH7にTBHPによるoxidative stressを負荷したところmembrane blebbingはほとんど観察されなっかた。一方、アンチセンスを導入していない細胞やカルパインの発現に影響しないアンチセンスを導入した細胞ではTBHP負荷により著しいmembrane blebbingを認めた。以上の結果より、カルパインがoxidative stressにおけるmembrane blebbingのkeyとなっていることが明らかになったとともに、カルパインの制御により虚血再潅流傷害を軽減しうることが示唆された。

In primary cultured hepatocytes, tert-butyl hydroperoxide(TBHP) is a kind of oxidative stress system, which is dependent on proteolytic enzymes. It is difficult to determine whether the inhibitor of TBHP is effective or not. The cells were introduced into the cells, and the cells were controlled. Cell line of human hepatoblastoma The first step is to open the door. The introduction efficiency of the HVJ-liposome's HuH7-foot sensor was marked by FITC and the introduction of the sensor into the confocal microscope was 100% demonstrated. The results of the investigation and the results of the investigation are shown in the table below. In the case of TBHP, the oxidative stress is negative and the membrane blebbing is negative. The effect of the introduction of TBHP on the development of TBHP in cells was studied. The above results show that the membrane blebbing of the key and the control of the blood flow are reduced.