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細胞質プロテアーゼ制御による肝虚血再潅流傷害の抑制

通过细胞质蛋白酶调节抑制肝脏缺血再灌注损伤

基本信息

批准号：
06671271
负责人：
梅下浩司
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

肝細胞の虚血再灌流傷害の機序を、2つのモデルを用いて検討した。1.ラット初代培養肝細胞にsuperoxideを負荷する系では、約15分後に細胞表面のsmall blebとほぼ時を同じくして、細胞質カルシウム濃度が上昇し始めた。30分後には700nMに達し、この頃large blebが形成され、LDHの遊離が始まった。細胞質プロテアーゼcalpainにspecificな阻害剤calpeptinを添加すると、superoxideによる細胞質カルシウムの上昇は抑えられなかったが、blebの形成やLDHの遊離が有意に抑制された。ラット初代培養肝細胞にtert-butylhydroperoxideを負荷する系では、25分後にblebが発生した。細胞膜の裏打ちをしているF-actinはblebの直下でも構造が保たれていることが、透過電顕およびrhodamin-phalloidinを用いたF-actin染色で確認された。また、bleb発生と同時に、Actin binding proteinのうちtalin、α-actininの減少が認められた。Blebの発生とactin binding proteinの減少は、細胞外カルシウムの除去、或いはcalpeptinの添加により抑えられた。以上の結果より、肝細胞にoxidative stressを負荷すると、カルシウムが細胞外から流入しcalpainが活性化され、その結果actin binding proteinが分解されblebを形成し、細胞死に至るmechanismが考えられた。細胞質プロテアーゼの制御により、細胞傷害が抑制されることが示された。現在calpainの活性の変化を測定中であり、その結果を踏まえて細胞障害の更なる抑制を目指したい。

The mechanism of liver cell reperfusion injury is discussed. 1. The superoxide concentration of primary cultured hepatocytes increased after 15 minutes. After 30 minutes, the concentration of LDH reached 700nM, and large bleb was formed. Cytoplasmic calpain specific inhibitor calpeptin is added, superoxide is added, cytosol is raised, bleb is formed, LDH is dissociated, and so on. In primary culture, hepatocytes were loaded with tert-butylhydroperoxide and bleb was produced after 25 minutes. F-actin staining was used to confirm the structure of cell membrane by electron microscopy and rhodamin-phalloidin staining. Actin binding protein and α-actinin decrease simultaneously. Bleb production and actin binding protein reduction, extracellular protein removal, or calpeptin addition As a result, oxidative stress loads in hepatocytes, extracellular calpain influx, activation, and degradation of actin binding protein, bleb formation, and cell death mechanisms are examined. Cytoplasmic damage control, cellular damage control, and cellular damage control The activity of calpain is measured in the following ways: