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歯周病原性細菌由来リピドAのヒト単核球細胞活性化による細胞内情報伝達機構の解析

牙周病原菌脂质A激活人单核细胞的细胞内信号转导机制分析

基本信息

批准号：
08672067
负责人：
小川知彦
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は,Porphyromonas gingivalis LPSの活性中心であるリピドAが,低毒性でかつ様々な免疫薬理学的作用を発揮するという宿主の免疫応答機構の一端を明らかにするため,同リピドAのヒト末梢血単核球細胞に対するサイトカイン産生誘導機構について,内毒素性大腸菌型合成リピドAのそれと比較し細胞レベルで検討した.すなわち,サイトカイン産生はELISA法,サイトカインmRNA発現はnorthern blotting分析,同細胞内のチロシン,セリン,スレオニンのリン酸化はwestern blotting法によりそれぞれ分析した.さらに,種々のprotein kinase inhibitorを用いて,両リピドAによるサイトカインの産生誘導能の抑制を総合的に調べることにより,これらリピドAのサイトカイン産生の調節機能に関与する情報伝達系の異同を明らかにした.まず,1)P.gingivalisを嫌気的条件下で培養後菌体を集め,その凍結乾燥菌体から温フェノール/水法によりLPSを抽出後,ヌクレアーゼP1による酵素処理および超遠心操作を繰り返し精製した.精製LPSを0.6%酢酸で2.5時間加熱処理後,クロロホルム/メタノール/水/トリエチルアミン混合液を加え分配を実施した.その下層画分をシリカゲルカラムクロマトに供し,リピドA画分を得た.大腸菌型の合成リピドA(compound 506)は,市販品を用いた.2)P.gingivalisリピドA刺激した単核球細胞は,compound 506のそれに比較し弱いIL-1β産生および同mRNAの発現を示した.また,両リピドA刺激した単核球細胞における細胞内リン酸化蛋白の誘導については,種々のチロシン,セリン,スレオニンリン酸化蛋白を検出した.さらに種々のprotein kinase inhibitorを用いて,サイトカインの産生に及ぼす影響について検討した結果,特にP.gingivalisリピドA刺激により細胞内のカルモジュリンキナーゼの活性化が認められた.P.gingivalisリピドAならびにcompound 506によるヒト単核球細胞からのこれらサイトカイン産生誘導ならびにその細胞内情報伝達系の結果から総合的に判断すると,P.gingivalisリピドAの低毒素性は,同リピドA刺激によりヒト単核球細胞内のカルモジュリンキナーゼが活性化されることにより,結果的にIL-1β産生が抑制されるものと推測される.ちなみにIL-1βは,LPSが内毒素性を発揮する際に重要なサイトカインに一つとして知られている.

In this study,Porphyromonas gingivalis LPS active center, low toxicity, immune response mechanism of the development of the role of one end of the host immune response mechanism, and A peripheral blood mononuclear cells to produce induction mechanism, endotoxin coliform synthesis of A and other cell comparison. ELISA, Northern blotting, Western blotting. In addition, the use of protein kinase inhibitor in the production of protein kinase inhibitors, protein kinase inhibitors, protein After culture, the cells were collected under the condition of P. gingivalis, and then freeze-dried cells were collected under the condition of P. gingivalis. After LPS was extracted, the cells were purified under the condition of P1 enzyme treatment and ultra-central operation. Purified LPS 0.6% acetic acid 2.5 time after heating treatment, the mixture of water and LPS was added and distributed. The lower layer of the painting is divided into two parts: the first part is divided into two parts: the second part is divided into three parts: the third part is divided into three parts: the fourth part is divided into four parts: the fourth part is Escherichia coli type synthetic protein A(compound 506) was used to stimulate cell proliferation. 2)P. genivalis was used to stimulate cell proliferation. In addition, the expression of intracellular cAMP was induced by the stimulation of cytosolic cAMP in cultured mononuclear cells. The protein kinase inhibitor was used to investigate the effect of protein kinase inhibitor on the production and development of protein kinase. P. gingivalis is a low toxic protein that can be induced by the stimulation of A and the activation of intracellular signaling pathways. IL-1β production was inhibited by IL-1β activation induced by IL-1 A stimulation. IL-1β is an important component of LPS in the development of endotoxin.