トロンボキサンA_2受容体の細胞情報伝達分子メカニズムの研究

血栓素A_2受体细胞信号转导分子机制研究

• 批准号: 08672496
• 负责人: 中畑 則道
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08672496/
• 关键词: トロンボキサンA_2; 受容体サブクラス; アストロサイトーマ; 血小板; 血管; 受容体抗体; Gq; 11; G12

トロンボキサンA_2受容体のサブクラスおよびその情報伝達機構を明らかにする目的で、ヒトアストロサイトーマ細胞、血小板および血管平滑筋細胞を用いて検討を加えた。はじめに、トロンボキサンA_2受容体の部分ペプチドに対する抗体を作製し、その抗体を用いたアフィニテイカラムを作製し、可溶化したアストロサイトーマ細胞膜および血小板膜のトロンボキサンA_2受容体を部分精製した後、ウエスタンブロッチイングにて抗体に反応するものを調べたところ、アストロサイトーマ細胞にはには58kDaと55kDaの2つの認識されるバンドが存在した。血小板では55kDaのもののみが確認された。トロンボキサンA_2受容体はWGAカラムとトロンボキサンA_2受容体抗体アフィニテイカラムを組み合わせることにより、効率的に濃縮された。このアフィニテイクロマトによって精製されたトロンボキサンA_2受容体を含むフラクションには抗Gq/11抗体に反応するGq/11を含むとともに、抗G12抗体とも反応し、G12がトロンボキサンA_2受容体と共役することが明らかになった。現在、トロンボキサンA_2受容体は少なくとも2種類が存在すると考えられている。ひとつはplacentaタイプで、もう一つは内皮細胞タイプである。アストロサイトーマよりmRNAをとり、RT-PCRにてcDNAにした後、placentaタイプおよび内皮細胞タイプを認識できるようなプライマーを用いてPCRを行ったところ、2種類のバンドが認められた。したがって、アストロサイトーマにはトロンボキサンA_2受容体のサブクラスが存在することをはじめて明らかにした。一方、血管平滑筋のトロンボキサンA_2刺激による情報伝達の解析より、ホスファチジルイノシトール特異的ホスホリパーゼCの活性化とともに、ホスファジルコリン特異的ホスホリパーゼCの活性化経路の存在を見い出した。以上の結果より、トロンボキサンA_2受容体にはサブクラスが存在し、Gq/11を介してホスフィチジルイノシトール特異的ホスホリパーゼCの活性化以外に、G12との共役があることが明らかになった。

The information transmission mechanism of the receptor A_2 is discussed in detail, such as the target cell, platelet and vascular smooth muscle cell. The A2 receptor is partially purified, and the antibody is partially purified. A cell with a molecular weight of 58kDa and a molecular weight of 55kDa exists. Platelet 55 kDa protein was identified. The receptor A_2 is the receptor antibody. The receptor A_2 is the receptor antibody. The anti-Gq/11 antibody is contained in the G12 receptor. Now, there are two kinds of receptors in A_2.ひとつはplacentaタイプで、もう一つは内皮细胞タイプである。mRNA, RT-PCR, cDNA, Placenta, Endothelial Cell, PCR, 2 Types of DNA The first is to open the door and open the door. The existence of activation pathway of C-specific protein was found in the analysis of protein expression and protein expression of C-specific protein. The above results show that the A_2 receptor is active, the Gq/11 receptor is active, and the G12 receptor is active

项目成果

Norimichi Nakahata, et al.: "Mastoparan elicits PGE_2 generation and inhibits inositol phosphate accumulation via different mechanisms in rabbit astrocytes" Biochim. Biophys. Acta. 1310. 60-66 (1996)

Norimichi Nakahata 等人：“Mastoparan 在兔星形胶质细胞中通过不同机制引发 PGE_2 生成并抑制磷酸肌醇积累”Biochim。

Hiromi Ishimoto et al.: "A comparative study of arachidonic acid metabolism in rabbit cutured astrocytes and human astrocytoma cells (1321Nl)" Gen. Pharmacol.27. 313-317 (1996)

Hiromi Ishimoto 等人：“兔切割星形胶质细胞和人星形细胞瘤细胞 (1321N1) 中花生四烯酸代谢的比较研究”Gen. Pharmacol.27。