三量体Gタンパク質αサブユニットの脂質ラフト局在と脂質修飾に関する研究

三聚体G蛋白α亚基脂筏定位及脂质修饰研究

• 批准号: 20054002
• 负责人: 中畑 則道
• 金额: $ 3.33万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20054002/
• 关键词: 脂質ラフト; シグナル伝逹; G_<q; 11>; Rho; 細胞遊走; メチル-β-シクロデキストリン; 細胞・組織; シグナル伝達; 生体分子; 糖領; 薬理学

脂質ラフトはスフィンゴ脂質、コレステロールやスフィンゴ糖脂質などに富む細胞膜マイクロドメインであるが、受容体を介するシグナル伝達が効率的に行われる場としても重要であることが近年示唆されている。P2Y_2受容体はG_<q/11>と共役することが知られているが、本研究ではNG108-15細胞を用いて、P2Y_2受容体を介するシグナル伝達と細胞の遊走反応における脂質ラフトの役割について検討を加えた。NG108-15細胞を蔗糖密度勾配遠心法を用いてトリトンX-100に不溶性の画分を分離すると、そこの画分には脂質ラフトマーカーであるコレステロールやフロティリン-1、ガングリオシドが局在した。G_<q/11>およびP2Y_2受容体は部分的にこの画分に存在した。さらに、メチル-β-シクロデキストリン(CD)処理は、脂質ラフトマーカーのみでなく、G_<q/11>およびP2Y_2受容体もその画分から消失させるとともに、P2Y_2受容体を介するホスファチジルイノシトール水解反応や細胞内Ca^<2+>濃度上昇作用のシグナル伝達、さらにP2Y_2受容体を介する細胞遊走反応も抑制した。これらのP2Y_2受容体を介する反応は、G_<q/11>特異的阻害薬のYM254890によっても強く抑制された。一方、CDあるいはYM254890処理は、P2Y_2受容体を介するRhoの活性化を強く抑制した。Rhoの下流と考えられるストレスファイバーの形成やコフィリンのリン酸化反応もCDあるいはYM254890処理によって強く抑制された。しかし、G_<12/13>のドミナントネガティブを発現させてもP2Y_2受容体を介するRhoの活性化シグナルは抑制されず、本細胞においてはP2Y_2受容体刺激によってG_<q/11>を介してRhoの活性化が引き起こされ、それは脂質ラフトにおいて起こっている事象であると考えられた。すなわち、脂質ラフトはP2Y_2受容体を介するシグナル伝達において重要な役割を有することが本研究によって明らかになった。

脂质筏是富含鞘脂，胆固醇，糖磷脂脂等的细胞膜微域，但最近有人建议它们作为一个受体介导的信号传导的部位也很重要。尽管已知P2Y_2受体与G_ <Q/11>耦合，但在这项研究中，我们研究了脂质筏通过P2Y_2受体和使用NG108-15细胞的细胞迁移反应在信号传导中的作用。当使用蔗糖密度梯度离心分离NG108-15细胞从Triton X-100不溶性分数分离时，将馏分与脂质筏标记物胆固醇，氟loty蛋白-1和神经胶质化定位。 G_ <Q/11>和P2Y_2受体在此部分中部分存在。此外，甲基-β-环糊精（CD）的处理不仅消除了馏分中的脂质筏标记，还消除了G_ <q/11>和P2Y_2受体，还抑制了P2Y_2受体介导的磷酸磷脂素溶解反应的P2Y__2受体介导的磷酸磷脂反应，并通过细胞内的pro <2 <2> <2 <2 <2 <2 <2 <2> <2 <2 <2 <2> <2 <2> <2> <2 <2> - 受体介导的。这些P2Y_2受体介导的反应也被g_ <q/11>特异性抑制剂YM254890强烈抑制。另一方面，CD或YM254890治疗通过P2Y_2受体强烈抑制RHO的激活。被认为是Rho下游的应激纤维的形成，以及Cofilin的磷酸化反应，也通过CD或YM254890处理强烈抑制。然而，显性阴性G_ <12/13>的表达不会通过P2Y_2受体抑制RHO的激活信号，在该细胞中，P2Y_2受体刺激导致通过G_ <Q/11>激活Rho，这被认为是在脂质筏中发生的事件。换句话说，这项研究表明，脂质筏在通过P2Y_2受体转导中具有重要作用。

项目成果

副甲状腺ホルモン受容体機能に及ぼすTctex-1の役割の解明

阐明 Tctex-1 对甲状旁腺激素受体功能的作用

• 发表时间: 2010
• 作者: 斎藤将樹;助川 淳;柳澤輝行
• 通讯作者: 柳澤輝行

TPアイソフォームに選択的な抗体の作製とその有効性の評価

TP亚型选择性抗体的生成及其功效评估

• 发表时间: 2008
• 作者: 後藤慎二;斎藤将樹;中畑則道
• 通讯作者: 中畑則道

神経系細胞におけるcAMPによるERK1/2活性化のシグナル伝達について

神经系统细胞中 cAMP 激活 ERK1/2 的信号转导

• 发表时间: 2008
• 期刊: 日薬理誌 113
• 作者: 小原祐太郎;中畑則道;Phihp J. S. Stork
• 通讯作者: Phihp J. S. Stork

NGFによるPC12細胞の神経突起伸展作用とチロシンヒドロキシラーゼタンパク質の安定化にERK5が関与する

ERK5 参与 NGF 诱导的 PC12 细胞神经突生长和酪氨酸羟化酶蛋白的稳定

• 发表时间: 2009
• 作者: 山内新;小原祐太郎;竹原伸;根本亙;高橋麻穂;Philip Stork;中畑則道
• 通讯作者: 中畑則道

15-deoxy-Δ^<12,14>-prostaglandin J_2は細胞内酸化還元状態を変化させてマウス海馬由来神経幹細胞の増殖能を調節する

15-脱氧-Δ^<12,14>-前列腺素J_2通过改变细胞内氧化还原状态调节小鼠海马源性神经干细胞的增殖能力

• 发表时间: 2009
• 作者: 桂崇之;守屋孝洋;中畑則道
• 通讯作者: 中畑則道