ランダムタンパク質を表層に提示した細胞の進化工学的機能開発

细胞表面展示随机蛋白质的进化工程功能开发

• 批准号: 10145234
• 负责人: 卜部 格
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10145234/
• 关键词: 人工タンパク質; ランダム配列; 酵素進化; ファーシーディスプレイ; モルテングロビュール

ランダムなアミノ酸配列をもつ人工タンパク質(約140アミノ酸残基)を大腸菌中で発現させたところ、得られた形質転換株の約50%がランダムタンパク質を発現しており、その約25%は水に可溶性であった。2種類の可溶性の人工タンパク質を精製してその性質を調べたところ、2次構造はもっていないものの、モルテングロビュール程度のコンパクトさをもった形をしており、千量体を形成し、弱いながらもエステラーゼ活性を示すことがわかった。以上の結果は、天然のタンパク質がきちんとした立体構造をとることと、高い触媒活性を示すことは、進化の過程で獲得された性質と考えられる。そして、ランダムタンパク質が進化の出発点としてふさわしい性質を有していることが明らかとなった。そこで、25個のランダムタンパク質をコードしている遺伝子にランダム変異を導入して得られた遺伝子ライブラリーをファージミドに挿入し、人工タンパク質をfdファージのgeneIIIタンパク質と融合した形で発現させ、2.1×10^6のライブラリーを得た。その際に導入した変異の率は全長13.0アミノ酸の中で平均3.45であり、ランダムタンパク質の発現効率は21.7%であった。得られたファージライブラリーのバラエティーは、10^6〜10^8程度であった。

About 50% of the mutant strains were found in E. coli, and about 25% of the mutant strains were soluble in water. 2. Solubility of artificial substances, refinement of their properties, adjustment of their structural properties, formation of their molecular structures, and enhancement of their activity. The above results show that the nature of the catalyst is different from that of the solid structure. The evolution of the nature of the universe is a matter of time. In this case, 25 different types of gene are introduced into the gene pool, and 2.1×10^6 different types of gene are introduced into the gene pool. The total length of the product was 13.0%, the average was 3.45%, and the quality of the product was 21.7%. Get a picture of the 10^6 ~ 10^8 degree

项目成果

A.Yamauchi et al.: "Characterization of soluble artificial proteins with random sequences" FEBS Letters. 421. 147-151 (1998)

A.Yamauchi 等人：“用随机序列表征可溶性人工蛋白质”FEBS Letters。