ランダム配列に対する切断部位特異抗体を利用したプロテアーゼ基質の網羅的探索

使用针对随机序列的切割位点特异性抗体全面搜索蛋白酶底物

• 批准号: 10163206
• 负责人: 大海 忍
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10163206/
• 关键词: プロテアーゼ; 基質タンパク質; 抗体; ペプチド合成; カスパーゼ; アポトーシス; カルパスタチン; カルパイン

切断部位特異抗体は,プロテアーゼによって限定分解を受けたポリベプチド鎖に特異的に反応するようにしくまれた特殊抗体で,受容体の活性化,転写因子の分解,組織傷害などにおけるカルパインの活性化や引き続いて起こる基質タンパク質の切断を細胞レベルで解析するために活用してきた.今回はこの抗体を一部ランダム配列をもつペプチドに対して作成し,アポトーシスの情報伝達系にかかわるカスパーゼの標的分子の探索に利用することを試みた.C末端にAspをもつランダム配列ペプチドに対する切断部位特異抗体は,カスパーゼ3/7の基質であるポリ(ADP-リボース)ポリメラーゼの断片や活性型カスパーゼ8と反応した.すなわち,この種の抗体が,比較的量の多いカスパーゼ標的タンパク質の同定に活用できることが示された.しかし,未知の微量成分を効率的に探索するためには,方法のさらなる改良が必要と考えられる.この研究過程で,カルパインの内在性阻害タンパク質であるカルパスタチンがアポトーシス細胞内でカスパーゼによって切断されることが発見された.カスパーゼ3/7は,カルパスタチンのN末端側のカルパイン阻害単位を開裂し,カルパイン抑制低下の引金となる.カルパインはアポトーシス誘導時に不活性前駆体から活性型に変化し,アポトーシスの制御にかかわると考えられる.本研究でカスパーゼ系とカルパイン系の接点が見いだされたことにより,アポトーシス制御機構の新たな展開が期待される.

Cut off parts of specific antibody は, プ ロ テ ア ー ゼ に よ っ て を qualified decomposition by け た ポ リ ベ プ チ ド lock に specific に anti 応 す る よ う に し く ま れ た で special antibody, the body の activeness, planning to write の decompose, tissue damage な ど に お け る カ ル パ イ ン の activeness や lead き 続 い て up こ る matrix タ ン パ ク qualitative の cut を cells レ ベ ル で solution Analyze するために make good use of て た た. Today back to は こ の antibody を a ラ ン ダ ム match column を も つ ペ プ チ ド に し seaborne て し consummate, ア ポ ト ー シ ス の intelligence 伝 da system に か か わ る カ ス パ ー ゼ の target molecules の に use す る こ と を try み た. C terminal に Asp を も つ ラ ン ダ ム match column ペ プ チ ド に す seaborne る は cut off parts of specific antibody, カ ス パ ー ゼ 3/7 の matrix で あ る ポ リ (ADP - リ ボ ー ス) ポ リ メ ラ ー ゼ の fragment や activity type カ ス パ ー ゼ 8 と anti 応 し た. す な わ ち, こ の が の antibody, comparing the amount of more than の い カ ス パ ー ゼ mark タ ン パ ク qualitative の with fixed に use で き る こ と が shown さ れ た. し か し, unknown の trace ingredients を sharper rate に explore す る た め に は, method の さ ら な る change Good が と necessary test え ら れ る. こ の で research process, カ ル パ イ ン の internality resistance against タ ン パ ク qualitative で あ る カ ル パ ス タ チ ン が ア ポ ト ー シ ス intracellular で カ ス パ ー ゼ に よ っ て cut さ れ る こ と が 発 see さ れ た. カ ス パ ー ゼ 3/7 は カ ル パ ス タ チ ン の N terminal side の カ ル パ イ ン resistance against 単 を cracking し, カ ル パ イ ン suppress low の lead gold と な る. カ ル パ イ ン は ア ポ ト ー シ ス induced に not active before 駆 body か ら activity type に - し, ア ポ ト ー シ ス の suppression に か か わ る と exam え ら れ る. This study で カ ス パ ー ゼ department と カ ル パ イ ン wearing の contact が い だ さ れ た こ と に よ り, ア ポ ト ー シ ス system royal institution の new た な expand が expect さ れ る.

项目成果

Igarashi,O.: "IL-12 receptor(IL-12R)expression and accumulation of IL-12Rβ1 and IL=12Rβ2 mRNAs in CD4+ T cells by costimulation with B7-2 molecules." Journal of Immunology. 160. 1638-1646 (1998)

Igarashi, O.：“通过与 B7-2 分子共刺激，IL-12 受体 (IL-12R) 在 CD4+ T 细胞中表达和积累 IL-12Rβ1 和 IL=12Rβ2 mRNA。”免疫学杂志 160。 1998）

Nonaka,T.: "Shigella flexneri YSH6000 induces two types of cell death,apoptosis and oncosis,in the differentiated human monoblastic cell line 0937." FEMS Microbiology Letters. (in press). (1999)

Nonaka,T.：“福氏志贺氏菌 YSH6000 在分化的人单核细胞系 0937 中诱导两种类型的细胞死亡：细胞凋亡和肿瘤死亡。”

Nakajima,T.: "Stabilization of p53 by adenovirus E1A occurs through its amino-terminal region by modification of the ubiquitin-proteasome pathway." Journal of Biological Chemistry. 273. 20036-20045 (1998)

Nakajima,T.：“腺病毒 E1A 通过修饰泛素蛋白酶体途径，通过其氨基末端区域稳定 p53。”

Miyoshi,H.: "Calpain μ is activated in hepatocyte mitochondria during ischemia-reperiasion injury." Hepatology Research. 10. 255-259 (1998)

Miyoshi, H.：“缺血再灌注损伤期间肝细胞线粒体中的钙蛋白酶 μ 被激活。” 肝病学研究。 10. 255-259 (1998)

Shiroki,K.: "Intracellular redistribution of truncated la protein produced by poliovirus 3Cpro-mediated cleavage." Journal of Virology. 73. 2193-2200 (1999)

Shiroki,K.：“脊髓灰质炎病毒 3Cpro 介导的裂解产生的截短 la 蛋白在细胞内重新分布。”