ランダムタンパク質を表層に提示した細胞の進化工学的機能開発

细胞表面展示随机蛋白质的进化工程功能开发

• 批准号: 11132243
• 负责人: 卜部 格
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11132243/
• 关键词: 人工タンパク質; ランダム配列; 酵素進化; ファージディスプレイ; 遷移状態アナログ

1)ランダムタンパク質を提示したファージライブラリーの作製昨年度の研究結果より、ランダムタンパク質が進化の出発点としてふさわしい性質を有していることが明らかとなった。そこで、25個のランダムタンパク質をコードしている遺伝子にPCR法で変異を導入して得られた遺伝子ライブラリーを、ファージミドpCANSS/SRに挿入し、ランダムタンパク質をfdファージのgene IIIタンパク質と融合した形で発現させ、2.1×10^6のライブラリーを得た。その遺伝子配列の解析により、PCRで導入した変異の率は全長130アミノ酸の中で平均3.45であった。また、ランダムタンパク質の発現効率は21.7%であった。したがって、得られたファージディスプレイライブラリーのバラエティーは、1.9×10^6〜6.2×10^7程度であると推定される。2)人工進化のための選択系の構築得られたライブラリーの中から進化の出発点となるランダムタンパク質を選定し、さらに、リガンド認識能力や触媒能力をもつ新しい機能性タンパク質に人工的に進化させるためには、効率の良い選択系を構築しなければならない。その一つとして、エステラーゼ活性の遷移状態アナログ(CA II)に対する親和性の差で選択する系を構築した。この選択系の有効性は、2種類のランダムタンパク質(RP3-42とRP-PR2-16)間の微小な親和性の差を識別し、RP-PR2-16ファージを濃縮できたことにより確認された。

1) in recent years, the results of last year's research were reviewed and the results of last year's research were reviewed. The results of last year's research were reviewed. This is the most important thing in the world. In the PCR method, you can get a fair share of the total number of dollars in the market. You can use the PCR method to buy the number of dollars you want to buy, the number of dollars you need to buy, the number of dollars you need to buy, the number of dollars you can buy, the number of dollars you can buy, the number of dollars you need to buy, the number of dollars you need to buy, the number of dollars you can buy, the number of dollars you can buy, the number of dollars you need to buy, and the number of dollars you need to buy. An average of 3.45 yuan per capita in the total length of 130% of the total income rate of analytical and PCR data was allocated to each other. The rate of infection is 21.7%. The levels of 1.9 × 10 ^ 6 ~ 6.2 × 10 ^ 7 are presumptive. 2) the selection of artificial information is based on the selection of information in the system. The selection of information is very important. The ability of the catalyst is improved. This is the first time that you choose to change the status (CA II), and choose the difference between the two. Select one of the two categories: RP3-42 RP-PR2-16 for minor and gender differences, and RP-PR2-16 for both minor and gender differences. Make sure that you do not.