权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

ケラチノサイト三次元培養系を用いたヒトパピローマウイルス遺伝子機能の解析

利用三维角质形成细胞培养系统分析人乳头瘤病毒基因功能

基本信息

批准号：
10151220
负责人：
酒井博幸
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10151220/
关键词：
子宮頚癌 HPV テロメレース転写因子

项目摘要

1. ケラチノサイト三次元培養系の確立。ヒト角化細胞を用いて三次元培養型を構築した。切片像の観察により皮膚の分化像にかなり近いモデルの構築に成功した。いくつかの分化マーカーに関しては確認済であるが、更に各種の指標となる蛋白の発現を検討している。2. 三次元培養系におけるウイルス複製機構の解析。三次元培養系を用いたウイルス複製機構の解析を進める前に、通常の培養細胞系において環状化したHPV・DNAの複製を観察した。ここでは分化に関わらず、低レベルのDNA複製が認められた。この実験系ではHPVのE1、E2が複製に関与しており、その他の遺伝子の機能は観察できなかった。この実験を三次元培養系に適応する予定である。3. E6/E7によるテロメラーゼ活性の調節。HeLa細胞中にはテロメラーゼ活性が高いレベルで検出されるが、E2の発現導入によってテロメラーゼ活性が低下することが明らかとなった。ここにもE6/E7の発現抑制が関与しており、p53やRBなど癌抑制因子を介した機構以外にもE6/E7が癌細胞の増殖能の維持に機能している可能性が示唆された。4. HeLa細胞増殖阻害におけるE2転写活性化能の意義について。HeLaなどHPV陽性癌細胞のE2発現による増殖阻害には、E2の持つ転写活性化能が重要である。この増殖阻害にはE2がE6/E7のプロモーター領域に結合することが必要と考えられており、このE2-DNA結合に転写活性化能が必要であることが示された。しかしこの必要性はDNA側のcontextに依存しており、プロモーター活性の低いDNA領域には転写活性化能を持たないE2でも効率よく結合できることが分かった。

1. Establishment of three-dimensional culture system. A three-dimensional culture model was constructed for keratinized cells. The slice image was successfully constructed by observing the skin differentiation image. The differentiation of protein is confirmed by the detection of protein. 2. Analysis of replication mechanism in three-dimensional culture system. Analysis of replication mechanism in three-dimensional culture system and detection of HPV DNA replication in common culture cell lines The DNA replication of this gene is related to the differentiation of DNA. This system is related to the replication of HPV E1 and E2, and the function of other genes is detected. This is a three-dimensional culture system. 3. E6/E7 is the key to the regulation of activity. HeLa cells have a high activity in the production of E2 and a low activity in the production of E2. This suggests that the inhibition of E6/E7 expression is related to the role of p53 and RB in the maintenance of cancer cell proliferation. 4. HeLa cell proliferation inhibition is the key to E2 activation. E2 expression in HeLa HPV positive cancer cells is important for inhibiting proliferation and for maintaining E2 activation. The E2/E6/E7 binding domain is necessary for this proliferation inhibition, and the E2-DNA binding domain is necessary for this activation. The necessity of DNA side of the context depends on the activity of the low DNA domain, the activity of the high DNA domain, the activity of the low DNA domain, the activity of the high DNA domain, the high DNA domain, the activity of the high DNA domain, the high DNA domain, the activity of the high DNA domain, the activity of the high DNA domain, the high DNA domain, the