シナプス強化の過程における特異的タンパク質合成の解析

突触强化过程中​​特异性蛋白质合成分析

• 批准号: 10156213
• 负责人: 鈴木 龍雄
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10156213/
• 关键词: postsynaptic density; dendrite; mRNA; local protein synthesis; シナプス可塑性; long-term potentiation

本計画ではシナプス後部に局在するmRNAの多数を効率的に検出,同定し,さらにはそれらの遺伝子クローニングを行うことを目的として研究を行った.ラット大脳からシナプス後肥厚部(PSD)を単離し,そこからRNAを抽出した.まずcDNAを作り,それをスターティングマテリアルとして,3'端に適当なヌクレオチドの組み合わせで結合したオリゴdTの混合物をanchor primerとし,もう一方には,任意の配列を持ったオリゴヌクレオチドの混合物をarbitorary primerとして用いて,アイソトープ標識デオキシヌクレオチド存在下でPCRを行った.得られたPCB産物を電気泳動で分離し、オートラジオグラフィーにて検出,同定した.上記で用いた乾燥ポリアクリルアミドゲルから,個々のバンドを正確に切り取り,ゲル内に含まれる約650種のDNAを抽出・回収し,再びPCRにて増幅して,アガロースゲル電気泳動で精製した.こうして得られたDNAのうち,現在までに約150種ほどの塩基配列を決定した.DNAデーターベースによるホモロジー検索の結果、23種類の遺伝子が既知のものであった.既にdendriteにmRNAが局在することが明らかにされているものの中ではMAP2が検出されていたが、他のものはそのmRNAのdendriteへの局在は報告されていないものであった.今回新たに未知の遺伝子として、しかもそのmRNAがdendriteに局在する可能性のあるものとして108個が見つかった.我々はそれらを仮にDem gene(遺伝子産物はDem protein)と名付けた.それらのうち,150 base以上の長さを持つ34クローンについて,in situ hybridizationを行いmRNAの局在を検証したところ,少なくとも16クローンのmRNAがdendriteに局在していることがわかった.以上の結果から,dendriteやPSD近傍に局在する遺伝子やタンパク質を同定するための方法として,我々の方法は十分に有効かつ効率の良い方法であることがわかった.また,現在までに異なった配列を持つものとして100種以上が確認され,なおがつまだ配列決定を待つものが450種ほどあることを考えると,mRNAがdendriteに局在するものの数は現在知られているよりもはるかに多く、少なくとも千のオーダーであると推定された.現在,残りの約450種の遺伝子の塩基配列決定と,in situ hybridizationでdendriteにmRNAが局在することが確認されたもののfull lengthを含む遺伝子のクローニングを進めている.

In this project, we will study the expression of most mRNA in the posterior part of the brain. A large portion of the posterior hypertrophic portion (PSD) is isolated and RNA is extracted. PCR was performed in the presence of a mixture of arbitary primer and 3 '-terminal cDNA sequences, which were randomly assigned to the sequence of arbitary primer and arbitary primer. The PCB products were separated by electromigration, and the results were consistent. In the above note, the DNA sequence was extracted and recovered correctly, and PCR amplification was carried out to refine the DNA sequence. The DNA sequence was determined for about 150 species. The DNA sequence was determined for 23 species. The mRNA of the mRNA of the There are 108 new genes that are unknown in this study. Dem gene(gene product) and Dem protein (gene protein) For example, the length of mRNA above 150 base is 34 ° C,in situ hybridization, mRNA is detected, and mRNA is detected at 16 ° C. As a result of the above, the dendrite and PSD are close to each other, and the method of determining the quality is very effective. More than 100 species are confirmed, 450 species are pending, and the number of mRNA in the genome is now known. At present, there are about 450 kinds of DNA sequences in the genome, which are determined in situ hybridization and mRNA sequence identification.