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シナプス強化の過程における特異的タンパク合成の解析

突触强化过程中特异性蛋白质合成分析

基本信息

批准号：
09260211
负责人：
鈴木龍雄
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09260211/
关键词：
postsynaptic density dendrite mRNA long-term potentiation local pretein synthesis シナプス可塑性

项目摘要

ラット大脳からシナプス後肥厚部(PSD)を単離し,そこからRNAを抽出した.まずcDNAを作り、それをスターティングマテリアルとして,アイソトープ標識デオキシヌクレオチド存在下でPCRを行った.得られたPCR産物を電気泳動で分離後,オートラジオグラフィーにて検出,同定した.上記で用いた乾燥ポリアクリルアミドゲルから,個々のバンドを正確に切り取り,ゲル内に含まれる約650種のDNAを抽出・回収し,アガロースゲル電気泳動で精製した.こうして得られたDNAのうち,現在までに約150種ほどの塩基配列を決定した.DNAデータベースによるホモロジー検索の結果,23種類の遺伝子が既知のものであった.既にdendriteにmRNAが局在することが明らかにされているものの中ではMAP2が検出されていたが,他のものはそのmRNAのdendriteへの局在は報告されていないものであった.今回新たに未知の遺伝子として,しかもそのmRNAがdendriteに局在する可能性のあるものとして108個見つかった.我々はそれらを仮にDem gene(遺伝子産物はDem protein)と名付けた.それらのうち,比較的長いものの中から2種を選んで,in situ hybridization(digoxygenin法)を行いmRNAが本当にdendriteに局在するかどうかについての検証を行った.Dem-1は正常のアダルトラット脳の神経細胞に広く分布していた.さらに,カイニン酸による痙攣誘発後4時間の脳ではDem-1の発現は顕著に誘導されていた.その際,大脳皮質や海馬の錐体細胞においてはdendrite内に明らかなmRNAの発現を観察した.Dem-2においては,カイニン酸刺激前のラット脳にはmRNAを検出できなっかたが,カイニン酸刺激後4時間の大脳皮質,海馬の神経細胞において著しいmRNAの発現誘導を観察した.その場合にもやはり,発現は神経細胞の細胞体ばかりでなくdendriteにも観察された。これまでの結果から考えると,dendriteやPSD近傍に局在する遺伝子やタンパク質を同定するための方法として,我々の方法は十分に有効なものであると確認された.今後は,残りの約450種の遺伝子の塩基配列決定と,塩基配列決定のなされたものについてはin situ hybridizationやNorthern blotによる解析,さらに,full lengthを含む遺伝子のクローニングを進め,タンパクとしての機能を明らかにする計画である.

A large portion of the posterior hypertrophic portion (PSD) is isolated and RNA is extracted. The cDNA sequence is encoded in the following format: The PCR products were isolated by electrophoresis, and then the PCR products were isolated and determined. In the above note, the DNA extracted from the sample containing about 650 kinds of DNA was extracted and recovered, and the DNA extracted from the sample was purified by electric electrophoresis. The DNA sequence was determined for about 150 species. The DNA sequence was determined for 23 species. In addition, the mRNA and protein levels of MAP2 in the mRNA and protein levels of MA This time, there are 108 possibilities for the unknown gene to be transmitted, and there are 108 possibilities for the mRNA to be transmitted. Dem gene(gene product) and Dem protein (gene protein) In addition, there are two kinds of gene expression in the brain cells, which are different from each other. In situ hybridization(dioxygenin method), the mRNA expression in the brain cells is different from that in the normal brain cells. After 4 hours, Dem-1 appeared and was induced. At the same time, the expression of mRNA in pyramidal cells of cortex and hippocampus was detected in the middle of dendrite.Dem-2 was used to detect mRNA expression in pyramidal cells of cortex and hippocampus before and 4 days after acid stimulation. In all cases, the cell body of the neuron is detected by the dendrite. The result of this study is that the method of determining the quality of PSD is very accurate. In the future, there are about 450 kinds of gene base alignment determination, gene base alignment determination, in situ hybridization and Northern blot analysis, in addition, the full length of gene base alignment determination, gene base hybridization, and gene base hybridization.