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生体機能調節因子としてのテトラヒドロビオプテリンの分子生物学的研究

四氢生物蝶呤作为生物功能调节剂的分子生物学研究

基本信息

批准号：
10169258
负责人：
一瀬宏
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Fujita Health University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

テトラヒドロビオプテリンは、カテコールアミン生合成やNO合成に必須であり、多くの生理機能への関与が示唆されている。我々は、BH4の生合成律速酵素であるGTPシクロヒドロラーゼI(GCH)の酵素化学的性質を調べるために、ヒトGCHを大腸菌発現系により大量発現し精製酵素標品の解析を行った。ヒトGCHのcDNAを大腸菌のGST融合タンパク質発現用ベクターに組み込み、GST融合ヒトGCH(GST-hGCH)を発現させた。GST-hGCHの精製は、グルタチオンセファロースカラムとゲルろ過カラムを用いて行った。また、野生型GCHばかりでなく、優性遺伝するドーパ反応性ジストニア(HPD)においてみつかったミスセンス変異体(M88,M201)と、劣性遺伝形式の悪性高フェニルアラニン血症(HPA)でみつかった変異体(M184,M211)のそれぞれを大腸菌で発現させ精製した。ネイティブなGCHは、活性部位を5つのオリゴマーで形成し、これが上下に2つ重なった十量体を形成することが報告されている。ゲルろ過上の溶出位置とキネティクスの解析からM88、M184、M201はオリゴマー形成が正しく行われず失活していると考えられた。これに対して、M211はオリゴマー形成は正常に行われているようだったが、GTPに対する親和性が大きく低下していた。以上の結果から、GCHのオリゴマー形成および活性発現に重要なアミノ酸残基が明らかとなった。また、変異体の性状にHPDとHPAとで明確な違いがなかったことから、HPDの発症を決める要因はGCHタンパク質の性質以外にあることが示唆された。本補助金により購入した超低温フリーザーは、精製酵素の保存やヒトGTPシクロヒドロラーゼI発現大腸菌の保存などに有効に活用されている。

TECHNO It is necessary to synthesize the であり, the くのphysiological function, and the が说されている. Chemical properties of the biosynthetic rhythm enzyme GTP シクロヒドロラーゼI(GCH) of BH4 Quality を Tune べるために, ヒトGCH を coliform 発 appear system により発発し refined enzyme standard の analytic を row った.ヒトGCH のcDNAをEliform coli のGST fusion タンパク発开発ターにgroup み込み, GST fusion ヒトGCH (GST-hGCH) を発出させた. GST-hGCH is a refined product, and it is a high-quality product.また, wild-type GCH ばかりでなく, superior sexual legacy 伝するドーパreflexive ジストニア(HPD)においてみつかったミスセンス変variant(M88,M201)と, Inferior form of genetic disease: High blood pressure syndrome (HPA) Variation (M184, M211) of Escherichia coli is now refined.ネイティブなGCHは、Active siteを5つのオリゴマーで Formationし、これが上下に2つ重なった十quantity を Formation することがreport されている. Analysis of the dissolution position of ゲルろとキネティクスのからM88, M184, M 201はオリゴマーformationが正しく行われず inactivationしていると考えられた.これに対して、M211はオリゴマーformationはnormalに行われているようだったが, GTP に対するaffinity が大きくlow していた. As a result of the above, it is clear that GCH のオリゴマーforms および active 発appears and is an important なアミノ acid residue が明らかとなった. HP Dの発 syndrome is caused by the fact that the nature of GCH is not the same as that of GCH. This subsidy will be used to purchase ultra-low temperature フリーザーは and refined enzyme storage やヒトGT Pseudol has shown that the preservation of coliform bacteria is effective and can be effectively used.