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プラナリア成体における形態形成遺伝子の異所的発現

成年涡虫形态发生基因的异位表达

基本信息

批准号：
10171230
负责人：
渡辺憲二
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Himeji Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10171230/
关键词：
プラナリア新生細胞 Na^+K^+-ATPase vasa-like gene

项目摘要

プラナリア成体の幹細胞(新生細胞)に外来遺伝子をを導入するために、ベクターの開発および、新生細胞の分子的特徴づけを行なった。ベクターの構成要素であるプロモーター、選択遺伝子の開発を終えた。プロモーターとして、プラナリアEFlおよびEF2遺伝子の5'プロモーター領域の遺伝子配列をuniversalPCR法により決定した。選択遺伝子として、プラナリアNa^+/K^+-ATPase遺伝子をin vitro mutagenesisで改変し、ウアバイン耐性Na^+/K^+-ATPase遺伝子を作成した,プラナリア成体への遺伝子導入をパーティクルガン、電気穿孔法により試みた。プラナリア用のベクターがまだ完成していないので、CMVプロモーターにGFPをつないだベクターを用いたが、有意なシグナルをえることができなかった。一方で、遺伝子導入の標的となる新生細胞の分子的な特徴づけが進んだ。新生細胞は細胞増殖と全能性で特徴づけられる。増殖に関して、DNA複製複合体の構成分子であるPCNA遺伝子をプラナリアでクローニングし、また、PCNAタンパク質特異抗体を作成した。PCNAが間充織に散在する新生細胞に特異的に発現していることを確認した。全能性に関しては、新生細胞のクロマトイド小体が卵の生殖顆粒に類似していることに注目し、生殖顆粒の構成要素の一つであるvasa遺伝子をプラナリアで探索した。結果、vasa-like gene A(vlgA)のクローニングに成功した。vlgAの発現をin situ hybridizationにより調べたところ、間充織スペースの新生細胞で発現することがわかった。再生過程において、vlgAは再生芽そして再生咽頭で発現し、これは新生細胞から一段分化の進んだ再生細胞においてもVlgAが残存しているか、または、なんらかの機能をはたしているものと考えられた

Adult stem cells (newborn cells) are characterized by the introduction of foreign genes, development of genes, and molecular characterization of newborn cells. The constituent elements of the selection process include: The gene alignment in the 5'region of the Efl1 and Efl2 genes was determined by the universal PCR method. Selection of DNA from the Na^+/K^+-ATPase gene in vitro mutagenesis, modification of the Na^+/K^+-ATPase gene, preparation of DNA from the Na^+/K^+-ATPase gene in vitro mutagenesis, introduction of DNA from the Na^+/K^+-ATPase gene in vitro mutagenesis, electroporation For example, if you want to use the Internet, you can use the Internet to access the Internet. If you want to use the Internet, you can use it. The molecular characteristics of the newborn cells are analyzed by the method of gene introduction. Neonatal cells are characterized by cell proliferation and totipotency. DNA replication complex component molecules, PCNA gene, PCNA protein specific antibodies PCNA was found to be a new cell-specific organism. Totipotency is related to the development of new cells, reproductive particles, and reproductive particles. As a result, the cloning of vasa-like gene A(vlgA) was successful. vlgA is found in situ hybridization, and new cells are found in interstitial tissue. The regeneration process, vlgA, regeneration bud, regeneration throat, regeneration cell, regeneration