ミクロゾーム型アルデヒド脱水素酵素の小胞体膜挿入機構

微粒体醛脱氢酶的内质网膜插入机制

• 批准号: 10172233
• 负责人: 柾木 龍一
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kansai Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10172233/
• 关键词: C-末端アンカー型膜蛋白質; HPC-1; msACOH; 小胞体膜挿入

今年度は細胞膜に局在するC-末端アンカー型膜蛋白質であるHPC-1/syntaxin lA(HPC-1)と小胞体に局在するC-末端アンカー型膜蛋白質であるミクロゾーム型アルデヒド脱水素酵素(msALDH)の局在化機構を調べた。まず、HPC-1についてはCOS細胞発現系を用いて解析した。野生型HPC-1はCOS細胞のゴルジ装置および細胞膜に局在し、C-末端疎水性領域を欠失した変異体は細胞質に留まることから、C-末端疎水性領域がHPC-1の膜挿入部位であることが確認された。HPC-1のC-末端側に糖鎖付加部位を融合したキメラには糖鎖が付加され、野生型同様ゴルジ装置および細胞膜に局在した。これらの結果より、HPC-1は小胞体膜にC-末端疎水性領域が挿入された後、ゴルジ装置を経由して細胞膜に移行することが示された。また、大腸菌マルトース結合蛋白質との種々のキメラを作製し、それらのCOS細胞内局在を調べた実験からHPC-1の疎水性領域を含むC-末端24アミノ酸残基が小胞体移行に必要であることがわかった。msALDHについては緑色蛍光蛋白質(GFP)とmsALDHのC-末端35アミノ酸残基(膜貫通領域と小胞体移行配列を含む)のキメラ(GFPALDH(35))の組み換え蛋白質を調製した。野生型とキメラ蛋白質とそれらをCOS細胞にマイクロインジェクションしたところ、インジェクション直後細胞質に分布していたキメラは6時間後(37℃条件下)に小胞体に移行した。これに対してGFPは細胞質に留まったままであった。GFPALDH(35)の小胞体移行は37℃条件下では1時間以内に起こったが、マイクロインジェクション後細胞を4℃に置くとGFPALDH(35)の小胞体移行は観察されず、この反応は温度依存性であることがわかった。ATP-γSとGTP-γSはGFPALDH(35)の小胞体移行を阻害した。これらの結果より、GFPALDH(35)の小胞体移行反応はエネルギー依存性であることおよびGTP結合蛋白質が関与することが示唆された。

This year, the C-terminal C-terminal The HPC-1 cell development system was analyzed. The wild type HPC-1 cell membrane structure and C-terminal aqueous domain were identified. The fusion of the sugar lock addition site on the C-terminal side of HPC-1 is due to the presence of sugar locks, wild-type similar devices, and cell membranes. As a result, HPC-1 was able to migrate from the cell membrane to the C-terminal aqueous domain. In addition, E. coli can bind protein and protein, which is essential for cell migration, and regulate the intracellular structure of COS cells. MsALDH is composed of green fluorescent protein (GFP) and C-terminal 35 amino acid residues (membrane penetration domain and microcellular migration alignment). Wild-type protein was found in COS cells, and the cytoplasm was distributed in COS cells after 6 hours (at 37℃). This is the first time I've ever seen one. The microcellular migration of GFPALDH (35) was observed at 37℃ within 1 hour after incubation at 4℃. ATP-γS and GTP-γS inhibit cell migration in GFPALDH(35). The results show that GFPALDH(35) is dependent on GTP binding proteins.

项目成果

Ryuichi Masaki: "Important roles of the C-terminal portion of HPC-1/syntaxin 1A in menbrane anchoring and intracellular localization" J.Biochem.124. 311-318 (1998)

Ryuichi Masaki：“HPC-1/突触蛋白 1A C 末端部分在膜锚定和细胞内定位中的重要作用”J.Biochem.124。