家族性筋萎縮性側索硬化症型変異を持つCu/ZnSODのGDNF/Ret系への影響

家族性肌萎缩侧索硬化症突变型 Cu/ZnSOD 对 GDNF/Ret 系统的影响

• 批准号: 10176211
• 负责人: 岩下 寿秀
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10176211/
• 关键词: GDNF; RET; 筋萎縮性側索硬化症; Cu; Zn SOD; 酸化ストレス

脊髄前角運動神経細胞には神経栄養因子作用を有するGDNF(glial cell line dcrived neurotrophic factor)の受容体であるRetチロシンキナーゼが発現している。脊髄前角運動神経細胞が変性する筋萎縮性側索硬化症の一部に常染色体優性遺伝形式をとる家族性筋萎縮性側索硬化症(FALS)があり、一部の患者においてCu/Zn-SOD遺伝子のgerm-line-mutationが見つかっている。現在、神経細胞内にてNOから生成されたperoxynitrite(酸化ストレス作用を有する)と変異Cu/Zn-SOD蛋白との反応性が高まり、神経細胞の生存に重要な蛋白質のチロシン残基等をニトロ化することが想定されている。今回、酸化ストレス及び変異Cu/Zn-SOD蛋白がRet蛋白にどのような影響を及ぼすかについて検討を試みた。1、 FALS型変異(Ala4Val,Cys6Phe,His43Arg,His46Arg,His48Gln,Asp90Ala,Gly93Ala,Glu100Gly,Asp101Gly,Ile104Phe,Leu106Valの計11種類)を有するCu/Zn-SOD cDNAを活性型Ret蛋白と共に線維芽細胞に強制発現させた。ウエスタンブロットを行うと、正常なCu/Zn-SOD蛋白とほぼ同じ高さ(約21kDa)にバンドが出るのがA4V,C6F,H43R,H46R,H48Q,G93A,L106Vの計7種類、正常よりも低い高さにバンドが出るのはD90A,E100G,D101G(約18kDa),I104F(約20kDa)の計4種類であり、蛋白の大きさとしてバラツキがあるものの、正常Cu/Zn-SOD蛋白と同じ程度に安定に発現する。2、 内因性の酸化ストレスであるperoxynitriteを作用させると、Ret蛋白のin vivo及びin vitroでのチロシンリン酸化が数倍に亢進した。現在、その作用機序について検討中である。

RET酪氨酸激酶是一种具有神经营养因子效应的GDNF的受体（神经胶质细胞系DCRIAL DRCROPINATIC因子），在脊髓前角运动神经元中表达。肌萎缩性侧索硬化症的一部分，其中脊柱喇叭运动神经元退化为家族性肌萎缩性侧面硬化症（FALS），一种常染色体显性遗传形式，并且在某些患者中已经发现了CU/Zn-SOD基因的生殖线膜。目前，预计由神经元中的NO和突变型Cu/Zn-SOD蛋白质产生的过氧亚硝酸盐（具有氧化应激效应）之间的反应性将增加，而硝酸盐酪氨酸残基等对神经元存活很重要的蛋白质。在本文中，我们试图研究氧化应激和突变型Cu/Zn-SOD蛋白对RET蛋白的影响。 1. Cu/Zn-SOD cDNA carrying FALS-type mutations (11 types in total: Ala4Val, Cys6Phe, His43Arg, His46Arg, His48Gln, Asp90Ala, Gly93Ala, Glu100Gly, Asp101Gly, Ile104Phe, and Leu106Val) were forced to express in fibroblasts together with the active Ret 蛋白质。 When Western blotting is performed, there are seven types of bands that appear at approximately the same height as normal Cu/Zn-SOD proteins (approximately 21 kDa), A4V, C6F, H43R, H46R, H48Q, G93A, and L106V, and four types that appear at a height lower than normal: D90A, E100G, D101G (approximately 18 kDa), and i104f（约20 kDa）。尽管存在蛋白质大小的变化，但它们的表达与正常CU/Zn-SOD蛋白相同。 2。当过氧亚硝酸盐（一种内源性氧化应激）被激活时，体内和体外的RET蛋白的酪氨酸磷酸化增加了几次。目前正在考虑作用机理。