家族性筋萎縮性側索硬化症型変異を持つCu/ZnSODのGDNF/Ret系への影響

家族性肌萎缩侧索硬化症突变型 Cu/ZnSOD 对 GDNF/Ret 系统的影响

• 批准号: 10176211
• 负责人: 岩下 寿秀
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10176211/
• 关键词: GDNF; RET; 筋萎縮性側索硬化症; Cu; Zn SOD; 酸化ストレス

脊髄前角運動神経細胞には神経栄養因子作用を有するGDNF(glial cell line dcrived neurotrophic factor)の受容体であるRetチロシンキナーゼが発現している。脊髄前角運動神経細胞が変性する筋萎縮性側索硬化症の一部に常染色体優性遺伝形式をとる家族性筋萎縮性側索硬化症(FALS)があり、一部の患者においてCu/Zn-SOD遺伝子のgerm-line-mutationが見つかっている。現在、神経細胞内にてNOから生成されたperoxynitrite(酸化ストレス作用を有する)と変異Cu/Zn-SOD蛋白との反応性が高まり、神経細胞の生存に重要な蛋白質のチロシン残基等をニトロ化することが想定されている。今回、酸化ストレス及び変異Cu/Zn-SOD蛋白がRet蛋白にどのような影響を及ぼすかについて検討を試みた。1、 FALS型変異(Ala4Val,Cys6Phe,His43Arg,His46Arg,His48Gln,Asp90Ala,Gly93Ala,Glu100Gly,Asp101Gly,Ile104Phe,Leu106Valの計11種類)を有するCu/Zn-SOD cDNAを活性型Ret蛋白と共に線維芽細胞に強制発現させた。ウエスタンブロットを行うと、正常なCu/Zn-SOD蛋白とほぼ同じ高さ(約21kDa)にバンドが出るのがA4V,C6F,H43R,H46R,H48Q,G93A,L106Vの計7種類、正常よりも低い高さにバンドが出るのはD90A,E100G,D101G(約18kDa),I104F(約20kDa)の計4種類であり、蛋白の大きさとしてバラツキがあるものの、正常Cu/Zn-SOD蛋白と同じ程度に安定に発現する。2、 内因性の酸化ストレスであるperoxynitriteを作用させると、Ret蛋白のin vivo及びin vitroでのチロシンリン酸化が数倍に亢進した。現在、その作用機序について検討中である。

GDNF(glial cell line dcrived neurotrophic factor) is a receptor for spinal cord motor neurons. A part of FALS patients have autosomal dominant genetic patterns, and a part of ALS patients have germ-line-mutation of Cu/Zn-SOD gene. At present, NO production in neurons and peroxynitrite(acidification function), Cu/Zn-SOD protein and high activity, important protein residues in the survival of neurons, etc. Now, the effect of different Cu/Zn-SOD proteins on Ret protein and the effect of different Cu/Zn-SOD proteins on Ret protein are discussed. 1. FALS-type variants (Ala4Val,Cys6Phe,His43Arg,His46Arg,His48Gln,Asp90Ala,Gly93Ala,Glu 100Gly,Asp101Gly,Ile104Phe,Leu106Val, and 11 species) were present. 7 species of Cu/Zn-SOD protein (about 21kDa), 7 species of A4V, C6F, H43R, H46R, H48Q, G93A, L106V, 4 species of Cu/Zn-SOD protein (about 21kDa), 4 species of D90A, E100G, D101G (about 18kDa), I104F (about 20kDa), 4 species of Cu/Zn-SOD protein (about 21 kDa), and 4 species of Cu/Zn-SOD protein (about 20kDa). Normal Cu/Zn-SOD protein is stable and appears at the same level. 2. Endogenous acidification of Ret protein in vivo and in vitro Now, the action mechanism is in the middle of the discussion.